کیت کلونینگ
GetCloneTM PCR Cloning Vector 20 rxn - CV1000
وکتور کلونینگ GetClone™ PCR Cloning Vector II (کد CV1000) محصول کمپانی SMOBIO تایوان، یک سیستم غربالگری مثبت (Positive Selection) با راندمان بالای ۹۰ درصد برای کلونینگ قطعات صاف (Blunt-end) از ۶ جفت باز تا ۱۱ کیلوباز است که بدون نیاز به فسفوریلاسیون قطعه یا غربالگری آبی/سفید با IPTG و X-Gal، کلونینگی سریع و مطمئن را با دو مارکر انتخابی آمپی‌سیلین و کانامایسین فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
وکتور کلونینگ GetClone™ PCR Cloning Vector II کد CV1000 محصول کمپانی معتبر SMOBIO تایوان، یک سامانه پیشرفته و کارآمد با مکانیسم انتخاب مثبت (Positive Selection) برای کلونینگ مستقیم قطعات و آمپلیکون‌های دارای انتهای صاف (Blunt-End) است. این وکتور به یک ژن کشنده (Lethal Gene) مجهز شده است که جایگاه کلونینگ در میانه آن قرار دارد؛ با الحاق (Ligation) موفقیت‌آمیز قطعه DNA هدف به این جایگاه، توالی ژن کشنده دچار شکست و اختلال عملکردی شده و تنها باکتری‌های حاوی وکتورهای نوترکیب (دارای قطعه الحاقی) قادر به رشد و تشکیل کلونی بر روی پلیت انتخابی خواهند بود. این مکانیسم هوشمند نیاز به انجام مراحل وقت‌گیر و هزینه‌بر غربالگری آبی/سفید با استفاده از IPTG و X-Gal و همچنین ریسک کلونی‌های مثبت کاذب ناشی از خودالحاقی (Self-ligation) وکتور را به طور کامل حذف می‌نماید. این وکتور قابلیت پذیرش قطعاتی با طول بسیار متنوع از ۶ جفت باز تا ۱۱ کیلوباز (6 bp - 11 kb) را دارا بوده و به دلیل انعطاف‌پذیری بالا، نسبت‌های متعددی از قطعه هدف به وکتور (۰.۵:۱ تا ۱۲:۱) را بدون نیاز به فسفوریلاسیون اولیه انتهای ۵' قطعه PCR می‌پذیرد. همچنین برخورداری از دو ژن مقاومت آنتی‌بیوتیکی مجزا برای آمپی‌سیلین و کانامایسین، دست پژوهشگر را در انتخاب محیط کشت باز می‌گذارد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی کمپانی SMOBIO در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل به آزمایشگاه‌های سراسر کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
قطعه هدف تکثیرشده با آنزیم‌های فاقد فعالیت A-tailing (نظیر آنزیم‌های Proofreading مانند Pfu DNA Polymerase که محصولات انتهای صاف تولید می‌کنند) را آماده نمایید؛ در صورت استفاده از Taq معمولی، ابتدا باید انتهای قطعه با آنزیم‌های ترمیم‌کننده به انتهای صاف (Blunt-end) تبدیل شود. نیازی به فسفوریلاسیون قطعه الحاقی نیست. در یک میکروتیوب عاری از نوکلئاز، مقدار مناسبی از وکتور GetClone™ را با قطعه الحاقی در نسبت مولی دلخواه بین ۰.۵:۱ تا ۱۲:۱، بافر لایگیشن و آنزیم T4 DNA Ligase مخلوط کرده و طبق دستورالعمل لایگیشن در دمای بهینه (معمولاً ۱۶ تا ۲۲ درجه سانتی‌گراد) انکوبه نمایید. پس از اتمام لایگیشن، مخلوط را مستقیماً به باکتری‌های مستعد شیمیایی (Competent Cells نظیر سویه‌های استاندارد DH5α) ترانسفورم کرده و بر روی پلیت‌های LB آگار حاوی آمپی‌سیلین یا کانامایسین کشت دهید. تنها باکتری‌های نوترکیب قادر به تشکیل کلونی خواهند بود.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی تخصصی و ایده‌آل برای کلونینگ مستقیم محصولات PCR با انتهای صاف (مانند آمپلیکون‌های حاصل از پلیمرازهای Proofreading)، کلونینگ قطعات DNA با طول بسیار کوتاه (تا ۶ جفت باز) و قطعات بلند (تا ۱۱ کیلوباز)، آماده‌سازی سازه‌های پلاسمیدی برای تعیین توالی (Sequencing)، کلونینگ سریع بدون نیاز به تهیه معرف‌های پرهزینه X-Gal و IPTG، و پروژه‌های ژنتیک مولکولی است که نیازمند غربالگری قطعی و بدون مثبت کاذب هستند.
شرایط نگهداری و پایداری
وکتور GetClone™ باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. در صورت عدم بروز آلودگی‌های تصادفی با نوکلئازها و اجتناب از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب، این محصول تا ۲۴ ماه پایداری و راندمان کاری خود را به طور کامل حفظ می‌نماید.