آنزیم تخلیص اگزوسپ مخصوص سکانس
PureIT ExoZAP PCR CIeanUP 500 rxn-A620603
کیت تخلیص آنزیمی PureIT ExoZAP PCR CleanUp با ظرفیت ۵۰۰ واکنش (کد A620603) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، ترکیبی بهینه‌شده از اگزونوکلئاز I حساس به حرارت (HL-ExoI) و آلکالین فسفاتاز نوترکیب میگو (rSAP) است که با حذف کامل پرایمرهای اضافی و dNTPهای مصرف‌نشده بدون هدررفت نمونه (Zero Sample Loss) و تنها در یک پروتکل دومرحله‌ای ۵ دقیقه‌ای، محصول PCR را برای تعیین توالی سنگر و SNP آنالیز آماده می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
معرف تخلیص آنزیمی PureIT ExoZAP PCR CleanUp کد کاتالوگ A620603 (بسته‌بندی ۵۰۰ واکنش، شامل ۱ تیوب ۱ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک راهکار سریع، تک‌لوله‌ای (One-tube) و فوق‌العاده کارآمد برای خالص‌سازی محصولات واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) از طریق تجزیه آنزیمی ناخالصی‌ها است. این محصول از ترکیب متعادل دو آنزیم اختصاصی شامل اگزونوکلئاز I حساس به حرارت (Heat Labile Exonuclease I یا HL-ExoI) و آلکالین فسفاتاز نوترکیب میگو (Recombinant Shrimp Alkaline Phosphatase یا rSAP) تشکیل یافته است. سازوکار عملکردی این کیت بدین صورت است که آنزیم HL-ExoI پرایمرهای تک‌رشته‌ای باقیمانده و الیگونوکلئوتیدهای تکثیرنشده را به طور کامل تجزیه نموده و آنزیم rSAP با دفسفریلاسیون سریع نوکلئوتیدهای اضافی (dNTPs)، آن‌ها را غیرفعال می‌سازد. مهم‌ترین مزیت این روش آنزیمی در مقایسه با ستون‌های سیلیکا و روش‌های رسوب‌دهی، حذف کامل مراحل سانتریفیوژ، شستشو و انتقال است که منجر به حفظ ۱۰۰ درصدی محصول PCR و عدم اتلاف نمونه (No Sample Loss) حتی برای آمپلیکون‌های بسیار کوتاه یا غلظت‌های اندک می‌شود. فرآیند در همان لوله واکنش و مستقیماً درون بافر PCR انجام شده و پس از یک انکوباسیون کوتاه در ۳۷ درجه سانتی‌گراد، با حرارت‌دهی در ۸۰ درجه سانتی‌گراد هر دو آنزیم به طور برگشت‌ناپذیر کاملاً غیرفعال می‌شوند. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات معتبر بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به مراکز تشخیصی، آزمایشگاه‌های توالی‌یابی و پژوهشگران کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
این پروتکل برای تخلیص ۵ میکرولیتر از محصول PCR تکثیریافته به کار می‌رود (در صورت استفاده از حجم‌های بالاتر، نسبت معرف را به تناسب افزایش دهید): ۱. ویال PureIT ExoZAP PCR CleanUp را از فریزر منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد خارج نمایید. ۲. محصول را در تمام مراحل آماده‌سازی روی یخ نگه دارید. ۳. مقدار ۲ میکرولیتر از معرف PureIT ExoZAP را به ۵ میکرولیتر محصول PCR اضافه کنید (معرف مستقیماً درون بافر PCR فعالیت کامل دارد). ۴. میکروتیوب یا پلیت را به آرامی پیپت کرده یا فیلیک نمایید و اسپین کوتاه دهید. ۵. مخلوط را به مدت ۲ الی ۵ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید تا پرایمرهای باقیمانده هضم شده و نوکلئوتیدهای اضافی با دفسفریلاسیون غیرفعال گردند. ۶. سپس لوله را به مدت ۳ الی ۱۰ دقیقه در دمای ۸۰ درجه سانتی‌گراد قرار دهید تا آنزیم‌های HL-ExoI و rSAP به طور کامل و غیرقابل برگشت غیرفعال شوند. ۷. محصول PCR تخلیص‌شده اکنون آماده ورود مستقیم به واکنش‌های حساس پایین‌دستی نظیر توالی‌یابی سنگر یا ژنوتایپینگ است (می‌توان محصولات تیمارشده را در دمای منفی ۲۰ درجه نگهداری کرد).
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این معرف تخصصی برای آماده‌سازی سریع و بی‌نقص آمپلیکون‌ها جهت توالی‌یابی مستقیم DNA به روش سنگر (Sanger Sequencing با الکتروفورز مویین)، آزمایش‌های طویل‌سازی پرایمر (Primer Extension)، بررسی و تمایز پلی‌مورفیسم‌های تک‌نوکلئوتیدی (SNP Analysis)، پایروتوالی‌یابی (Pyrosequencing)، و کلیه سنجش‌های حساس آنالیزی که حضور پرایمر دایمرها یا dNTPهای اضافی باعث نویز در کروماتوگرام یا خطا در نتایج می‌شود، ایده‌آل است.
شرایط نگهداری و پایداری
محصول PureIT ExoZAP PCR CleanUp باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. فرمولاسیون آنزیمی تا تاریخ انقضای درج‌شده روی لیبل ویال در شرایط منفی ۲۰ درجه کاملاً پایدار باقی می‌ماند. جهت حفظ پایداری کاتالیزوری آنزیم‌های حساس به دما، توصیه می‌شود ویال در حین مصرف بر روی کول‌باکس یا حمام یخ قرار گیرد و از چرخه‌های مکرر گرم‌شدن در دمای اتاق پرهیز گردد.