مستر میکس مولتیپلکس برند امپلیکون
Multiplex TEMPase 2x Master Mix A260303-1
مستر میکس ۲ برابری Multiplex TEMPase 2x Master Mix (کد کاتالوگ A260303-1) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک معرف آماده مصرف و همه‌کاره (All-in-one) حاوی آنزیم پلیمراز هات‌استارت TEMPase، سیستم بافری بهینه‌سازی‌شده برای تکثیر هم‌زمان چند توالی، dNTPs و غلظت اولیه ۳ میلی‌مولار MgCl2 به همراه ویال اختصاصی منیزیم ۲۵ میلی‌مولار است که اجرای آزمون‌های Multiplex PCR را در ژنوتایپینگ، پزشکی قانونی و تشخیص مولکولی به شکلی سریع، دقیق و با کمترین نیاز به بهینه‌سازی میسر می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف Multiplex TEMPase 2x Master Mix با کد کاتالوگ A260303 (بسته‌بندی ۵۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتری شامل ۱۰ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری مستر میکس به همراه ۱ ویال ۱.۵ میلی‌لیتری منیزیم کلراید ۲۵ میلی‌مولار) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، واکنشی یکپارچه و بهینه‌سازی‌شده برای تکثیر هم‌زمان دو یا چند قطعه هدف DNA در یک تیوب واکنش (Multiplex PCR) است. این مستر میکس شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، سیستم بافری پیشرفته جهت برقراری تعادل در رقابت اتصال پرایمرها، مقادیر متوازن دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (dNTPs) و غلظت ۶ میلی‌مولار کلرید منیزیم در مستر میکس ۲ برابری (معادل ۳ میلی‌مولار نهایی در واکنش) می‌باشد. به دلیل مهار کامل جایگاه فعال آنزیم TEMPase در دمای اتاق توسط یک پیوند شیمیایی، در مراحل چیدمان اولیه و نخستین شیب حرارتی ترموسایکلر هیچ‌گونه اتصال غیراختصاصی پرایمر یا تشکیل پرایمر دایمر رخ نمی‌دهد؛ این ویژگی امکان راه‌اندازی آسان و دقیق آزمایش را در دمای اتاق بدون نیاز به کار روی یخ فراهم می‌آورد. فرمولاسیون بافری اختصاصی این کیت، نیاز به بهینه‌سازی‌های طولانی‌مدت و پیچیده در توسعه تست‌های مالتی‌پلکس را به حداقل رسانده و بازدهی و شدت باندهای یکدستی را در طول تکثیر هم‌زمان اهداف مختلف ایجاد می‌کند. همچنین همراه داشتن ویال مجزای کلرید منیزیم ۲۵ میلی‌مولار در بسته‌بندی، آزادی عمل کاملی را برای افزایش غلظت منیزیم تا ۵ میلی‌مولار در سنجش‌های پرچالش فراهم می‌سازد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده و ارائه‌دهنده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به آزمایشگاه‌های تحقیقاتی، پزشکی قانونی و مراکز تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال مستر میکس و پرایمرها را از فریزر خارج نموده و پس از ذوب کامل، به خوبی تکان داده و اسپین کوتاه نمایید تا از تمرکز موضعی نمک‌ها ممانعت به عمل آید (با توجه به ماهیت هات‌استارت آنزیم، الزامی به کار بر روی یخ وجود ندارد و ستاپ در دمای اتاق امکان‌پذیر است). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر به ترتیب زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس Multiplex TEMPase 2x: مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X حاوی ۳ میلی‌مولار منیزیم)
محلول ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پیش‌فرض ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر، طبق جدول ۱ الی ۴ میکرولیتر جهت رسیدن به ۳.۵ تا ۵.۰ میلی‌مولار افزوده شود)
پرایمرهای فوروارد هر هدف (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر به ازای هر جفت (غلظت اولیه پیشنهادی ۰.۲ میکرومولار، بازه ۰.۱ تا ۱.۰ میکرومولار)
پرایمرهای ریورس هر هدف (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر به ازای هر جفت (غلظت اولیه پیشنهادی ۰.۲ میکرومولار، بازه ۰.۱ تا ۱.۰ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی مخلوط واکنش را به آرامی پیپت کرده، در میکروتیوب‌ها یا چاهک‌های پلیت تقسیم نموده و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۳۰ الی ۴۰ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵۰ الی ۹۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها؛ طراحی با دمای ذوب یکسان توصیه می‌شود)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵۰ الی ۹۰ ثانیه (بر مبنای نرخ پلیمریزاسیون ۱۰۰۰ جفت‌باز در دقیقه) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این مستر میکس انتخابی استاندارد برای انواع واکنش‌های چندگانه PCR (Multiplex PCR)، غربالگری‌های ژنتیکی و ژنوتایپینگ، آنالیزهای DNA در پزشکی قانونی (Forensic DNA Testing)، پنل‌های تشخیصی هم‌زمان عوامل عفونی (باکتریایی و ویروسی)، بررسی ریزماهواره‌ها (Microsatellite/STR) و شناسایی حذف‌ها یا مضاعف‌شدگی‌های ژنی است.
شرایط نگهداری و پایداری
مستر میکس و ویال MgCl2 باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شوند و تا تاریخ انقضای درج‌شده روی برچسب دارای پایداری و راندمان کامل هستند. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از افت کیفیت ناشی از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب جلوگیری شود.