آنزیم هات استارت برند smobio با غلظت 5 یونیت در هر میکرولیتر
ExcelTaq Hot Start II DNA Polymerase(5 U/ul)-TP5000
آنزیم هات‌استارت ExcelTaq™ Hot Start II DNA Polymerase با غلظت 5 U/µl (کد TP5000) محصول کمپانی SMOBIO تایوان، آنزیمی نوترکیب با مهارکننده مبتنی بر آپتامر (Aptamer-based) است که با حذف کامل مرحله طولانی فعال‌سازی اولیه حرارتی، امکان چیدمان در دمای اتاق و تکثیر فوق‌العاده حساس تا ۱ فمتوگرم پلاسمید و طول ۱۰ کیلوباز را میسر می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
آنزیم ExcelTaq™ Hot Start II DNA Polymerase کد TP5000 محصول کمپانی معتبر SMOBIO تایوان، نسل نوین آنزیم‌های Hot Start Taq نوترکیب مقاوم به حرارت است که به منظور حذف یا به حداقل رساندن تکثیرهای غیراختصاصی و پرایمر دایمرها طراحی شده است. تفاوت بنیادین این آنزیم با سایر هات‌استارت‌های متداول در استفاده از یک مهارکننده اختصاصی مبتنی بر آپتامر (Aptamer-based inhibitor) نهفته است؛ این آپتامر در دماهای زیر ۴۵ درجه سانتی‌گراد به صورت برگشت‌پذیر به جایگاه فعال آنزیم متصل شده و آن را به طور کامل غیرفعال نگه می‌دارد. به محض رسیدن دمای واکنش به چرخه معمول واسرشت‌سازی در PCR، آپتامر جدا شده و آنزیم فوراً فعال می‌گردد. در نتیجه، این مکانیسم هوشمند نیاز به مرحله طولانی و آسیب‌رسان فعال‌سازی اولیه حرارتی (۱۰ الی ۱۵ دقیقه در ۹۵ درجه که در آنزیم‌های تغییریافته شیمیایی الزامی است) را به طور کامل حذف کرده و مانع از تخریب الگوهای حساس DNA می‌شود. این محصول با حساسیت ردیابی استثنایی (تا ۱ پیکوگرم cDNA و ۱ فمتوگرم پلاسمید DNA) و نرخ بالای سنتز، امکان چیدمان در دمای اتاق و تکثیر اهدافی با طول متنوع تا ۱۰ کیلوباز (10 kb) را فراهم می‌آورد. همچنین فعالیت دست‌نخورده ترانسفرازی آنزیم سبب افزودن نوکلئوتید آدنین به انتهای '۳ (A-tailing) و سازگاری کامل با فرآیند TA Cloning می‌گردد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی و مستقیم SMOBIO در ایران، اصالت کامل کالا، سلامت زنجیره سرمایی نگهداری و تحویل استاندارد این محصول را برای جامعه علمی و پژوهشی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
اجزای واکنش را روی یخ یا در دمای اتاق قرار دهید؛ به دلیل حضور آپتامر مهارکننده، چیدمان کامل واکنش در دمای اتاق (Room Temperature Setup) بدون هیچ‌گونه ریسک ایجاد باندهای غیراختصاصی امکان‌پذیر است. در یک میکروتیوب عاری از نوکلئاز، مقدار متناسب از بافر واکنش ۱۰ برابری، مخلوط dNTPs (غلظت نهایی ۰.۲ میلی‌مولار)، پرایمرهای اختصاصی فوروارد و ریورس (غلظت نهایی ۰.۲ الی ۰.۴ میکرومولار)، DNA الگو (از مقادیر بسیار کم در حد ۱ فمتوگرم تا ۵۰۰ نانوگرم متناسب با نوع الگو) و ۰.۲۵ تا ۰.۵ میکرولیتر از آنزیم ExcelTaq Hot Start II (معادل ۱.۲۵ تا ۲.۵ واحد در واکنش ۵۰ میکرولیتری) را ترکیب کرده و با آب مقطر عاری از نوکلئاز به حجم نهایی برسانید. مخلوط را به آرامی پیپت کرده و اسپین کوتاه نمایید. پروتکل حرارتی بدون نیاز به فاز پیش‌گرمایش طولانی آغاز می‌شود: واسرشت‌سازی اولیه معمولی در ۹۴ الی ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲ الی ۳ دقیقه (صرفاً برای باز شدن دو رشته الگو و نه فعال‌سازی آنزیم)، سپس ۲۵ الی ۳۵ چرخه حرارتی شامل واسرشت‌سازی در ۹۴ تا ۹۵ درجه (۲۰ الی ۳۰ ثانیه)، اتصال پرایمرها در دمای بهینه (۲۰ الی ۳۰ ثانیه) و مرحله امتداد در دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد (به ازای هر ۱ کیلوباز حدود ۴۵ تا ۶۰ ثانیه)، و در نهایت امتداد تکمیلی در دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه اجرا شود.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این آنزیم انتخابی ایده‌آل برای واکنش‌های PCR با اختصاصیت و حساسیت بسیار بالا، تکثیر اهداف از الگوهای با غلظت بسیار کم یا ارزشمند (Low-copy templates)، تولید محصولات با انتهای برجسته '3 dA جهت TA Cloning مستقیم، واکنش‌های مالتی‌پلکس (Multiplex PCR)، واکنش‌های RT-PCR، غربالگری کلونی‌ها (Colony PCR) و تکثیر قطعات بلند تا ۱۰ کیلوباز است.
شرایط نگهداری و پایداری
آنزیم باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. به واسطه پایداری حرارتی بالای فرمولاسیون و مهارکننده آپتامر، این آنزیم در صورت پرهیز از آلودگی‌های متقاطع تا ۲۴ ماه پایداری کاتالیزوری و کارایی اختصاصی خود را به طور کامل حفظ می‌نماید. جهت حفظ سلامت آنزیم در دفعات مصرف بالا، استفاده از کول‌باکس‌های سرد آزمایشگاهی توصیه می‌شود.