کیت کلونینگ وکتور
GetClone PCR Cloning Vector ll, 20 RXN CV1100
وکتور کلونینگ GetClone™ PCR Cloning Vector II (کد کاتالوگ CV1100) محصول کمپانی SMOBIO تایوان، یک سامانه غربالگری مثبت (Positive Selection) با راندمان فراتر از ۹۰ درصد برای کلونینگ مستقیم قطعات و آمپلیکون‌های انتهای صاف (Blunt-end) از ۶ جفت باز تا ۱۱ کیلوباز است که بدون نیاز به فسفوریلاسیون قطعه و بدون نیاز به IPTG و X-Gal، کلونینگی مطمئن را با دو مارکر انتخابی آمپی‌سیلین و کانامایسین فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
کیت وکتور کلونینگ GetClone™ PCR Cloning Vector II با کد کاتالوگ CV1100 (سایز ۲۰ واکنش) محصول کمپانی معتبر SMOBIO تایوان، سامانه‌ای پیشرفته، سریع و با کارایی بالا برای کلونینگ مستقیم قطعات DNA و آمپلیکون‌های دارای انتهای صاف (Blunt-end) است. مبنای عملکرد این وکتور بر پایه سیستم انتخاب مثبت (Positive Selection) از طریق تخریب ژن کشنده (Lethal Gene) بنا شده است؛ جایگاه کلونینگ در توالی این ژن کشنده تعبیه شده و با الحاق (Ligation) موفقیت‌آمیز قطعه DNA هدف، بیان این ژن دچار اختلال می‌شود. در نتیجه، تنها باکتری‌های حاوی وکتورهای نوترکیب قادر به تکثیر و تشکیل کلونی بر روی پلیت انتخابی خواهند بود و سلول‌های حاوی وکتور خودالحاق‌شده (Self-ligated) از بین می‌روند. این سازوکار هوشمند، فرآیند وقت‌گیر و هزینه‌بر غربالگری آبی/سفید با IPTG و X-Gal را حذف کرده و مانع از پیدایش کلونی‌های مثبت کاذب می‌گردد. این وکتور انعطاف‌پذیری فوق‌العاده‌ای داشته و نسبت‌های مولی متنوع اینسرت به وکتور (۰.۵:۱ تا ۱۲:۱) را پوشش می‌دهد. همچنین قابلیت پذیرش قطعاتی با طول بسیار متنوع از ۶ جفت باز تا ۱۱ کیلوباز (6 bp to 11 kb) را بدون نیاز به فسفوریلاسیون اولیه قطعه PCR داراست. برخورداری از دو ژن مقاومت آنتی‌بیوتیکی مستقل برای آمپی‌سیلین و کانامایسین نیز آزادی عمل کاملی در انتخاب استراتژی سلکشن به کاربر می‌بخشد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی و مستقیم کمپانی SMOBIO در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا زمان تحویل به پژوهشگران و مراکز تحقیقاتی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
برای آغاز فرآیند، قطعات هدف تکثیرشده با پلیمرازهای Proofreading (نظیر Pfu DNA Polymerase که انتهای صاف تولید می‌کنند) یا قطعات DNA با انتهای Blunt را آماده نمایید (نیازی به فسفوریلاسیون قطعات PCR نیست). در یک میکروتیوب استریل عاری از نوکلئاز، مقدار مناسب از وکتور GetClone™ را با قطعه الحاقی در نسبت مولی دلخواه بین ۰.۵:۱ تا ۱۲:۱، بافر لایگیشن و آنزیم T4 DNA Ligase مخلوط کنید. واکنش را بر اساس پروتکل استاندارد لایگیشن در دمای بهینه (معمولاً ۱۶ تا ۲۲ درجه سانتی‌گراد) انکوبه نمایید. پس از اتمام زمان اتصال، محصول لایگیشن را مستقیماً به سلول‌های مستعد شیمیایی (Competent Cells نظیر سویه استاندارد DH5α) ترانسفورم کرده و بر روی پلیت‌های LB آگار حاوی آمپی‌سیلین یا کانامایسین کشت دهید. پلیت‌ها را به مدت ۱۶ الی ۱۸ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید؛ با توجه به ماهیت غربالگری مثبت، تمامی کلونی‌های رشد‌یافته حاوی سازه نوترکیب هستند.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی ایده‌آل برای کلونینگ مستقیم آمپلیکون‌های حاصل از آنزیم‌های با دقت بالا (High-fidelity / Proofreading)، کلونینگ سریع قطعات بسیار کوتاه (از ۶ جفت باز) و قطعات بلند ژنومی (تا ۱۱ کیلوباز)، آماده‌سازی سازه‌های پلاسمیدی برای تعیین توالی (Sequencing)، کلونینگ بدون نیاز به معرف‌های پرهزینه X-Gal و IPTG، و پروژه‌های مهندسی ژنتیک با نیاز به غربالگری قطعی و بدون مثبت کاذب است.
شرایط نگهداری و پایداری
کیت وکتور GetClone™ باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. در صورت رعایت شرایط نگهداری استاندارد و جلوگیری از آلودگی‌های متقاطع با نوکلئازها یا چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب، کیفیت عملکردی و راندمان این کیت تا ۲۴ ماه به طور کامل حفظ می‌گردد.