کیت ریورس ترنسکریپتاز مناسب سنتز cDNA
ExcelRT Reverse Transcription Kit-Rp1300 (100-200rxn)
کیت سنتز cDNA کامل ExcelRT™ Reverse Transcription Kit (کد RP1300) کمپانی SMOBIO تایوان، مجموعه‌ای جامع و کارآمد برای سنتز رشته اول cDNA با کیفیت بالا از الگوهای Total RNA و mRNA است که با بهره‌مندی از آنزیم نوترکیب M-MLV با پایداری حرارتی تا ۵۰ درجه سانتی‌گراد، مهارکننده اختصاصی RNAok™ و هر دو آغازگر Oligo (dT)20 و Random Hexamers، سنتز پیوسته قطعات تا ۸ کیلوباز را میسر می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
کیت سنتز رشته اول cDNA با عنوان ExcelRT™ Reverse Transcription Kit کد RP1300 (در سایز ۱۰۰ الی ۲۰۰ واکنش) محصول کمپانی معتبر SMOBIO تایوان، یک بسته کامل و همه‌منظوره جهت انجام رونویسی معکوس با بازدهی بالا و اختصاصیت فوق‌العاده است. این کیت شامل آنزیم مهندسی‌شده ExcelRT™ Reverse Transcriptase بر پایه ویروس لوکمی موشی مالونی (Recombinant M-MLV) است که فعالیت ذاتی ریبونوکلئازی آن (RNase H activity) به طور هدفمند کاهش یافته تا از تخریب زودرس الگوی RNA در طول سنتز ممانعت به عمل آید. این آنزیم پایداری حرارتی بهینه‌ای در بازه دمایی ۳۷ الی ۵۰ درجه سانتی‌گراد نشان می‌دهد؛ از این رو با اجرای واکنش در دمای ۵۰ درجه سانتی‌گراد، ساختارهای ثانویه پیچیده و نواحی متراکم RNA به آسانی باز شده و سنتز اهداف بلند تا بیش از ۸ کیلوباز (> 8 kb) با پردازش‌پذیری بالا (Processivity) محقق می‌شود. علاوه بر این، کیت به مهارکننده اختصاصی RNAok™ RNase Inhibitor مجهز شده است که سیستم را در برابر انواع ریبونوکلئازهای مخرب (RNase A، RNase B و RNase C) محافظت می‌کند. همراه داشتن هر دو آغازگر استاندارد Oligo (dT)20 و Random Hexamers به صورت مجزا، آزادی عمل کاملی را برای رونویسی از mRNAهای دارای دم Poly(A) یا RNA کل فراهم می‌سازد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی و ارائه‌دهنده مستقیم برند SMOBIO در ایران، اصالت صددرصدی کالا و حفظ دقیق زنجیره سرمایی نگهداری آن را برای جامعه دانشگاهی و پژوهشی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
برای راه‌اندازی واکنش سنتز رشته اول cDNA در حجم نهایی ۲۰ میکرولیتر، ابتدا در یک میکروتیوب عاری از RNase مقدار مناسب از RNA الگو (تا ۵ میکروگرم Total RNA یا تا ۵۰۰ نانوگرم mRNA) را با پرایمر انتخابی (۱ میکرولیتر Oligo (dT)20 یا ۱ میکرولیتر Random Hexamers یا مخلوط هر دو) و مخلوط dNTPs ترکیب کرده و حجم را با آب عاری از نوکلئاز به ۱۰ میکرولیتر برسانید. مخلوط را به مدت ۵ دقیقه در دمای ۶۵ درجه سانتی‌گراد قرار داده و بلافاصله حداقل به مدت ۱ دقیقه روی یخ منتقل کنید تا ساختارهای ثانویه واسرشت شوند. سپس بافر ۵ برابری واکنش، مهارکننده RNAok™ RNase Inhibitor و آنزیم ExcelRT™ Reverse Transcriptase را به تیوب افزوده و به آرامی با پیپت مخلوط کنید. در صورت استفاده از Random Hexamers، تیوب را ابتدا ۱۰ دقیقه در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد قرار دهید؛ سپس انکوباسیون اصلی را در دمای ۴۲ الی ۵۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ الی ۵۰ دقیقه اجرا کنید (دمای ۵۰ درجه سانتی‌گراد برای الگوهای دارای ساختار ثانویه محکم توصیه می‌شود). در پایان، واکنش را با قرار دادن در دمای ۸۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه متوقف سازید.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این کیت انتخابی کاربردی برای سنتز رشته اول cDNA جهت استفاده در واکنش‌های کمی Real-Time RT-PCR (سنجش‌های qPCR مبتنی بر SYBR Green یا پروب‌های TaqMan)، واکنش‌های استاندارد End-point RT-PCR، کلونینگ قطعات ژنی با طول بلند (Long-range RT-PCR تا ۸ کیلوباز)، ساخت کتابخانه‌های cDNA و بررسی الگوهای رونویسی رونوشت‌های با بیان ضعیف و الگوهای RNA با ساختار ثانویه پیچیده است.
شرایط نگهداری و پایداری
تمامی اجزای کیت RP1300 باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شوند. در صورت اجتناب از آلودگی‌های تصادفی با RNase و ممانعت از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب، کیت تا ۲۴ ماه پایداری عملکردی و راندمان کامل خود را حفظ می‌نماید. جهت تسهیل در مصرف روتین و حفظ حداکثر کیفیت، آلیکوت کردن معرف‌ها توصیه می‌شود.