آنزیم ریورس ترنسکریپتاز مناسب سنتز cDNA
ExcelRT Reverse Transcriptase, 200 U/ul,20000U RP1000
آنزیم ترنسکریپتاز معکوس ExcelRT™ Reverse Transcriptase با غلظت 200 U/µl و حجم کل ۲۰,۰۰۰ واحد (کد RP1000) محصول کمپانی SMOBIO تایوان، یک آنزیم نوترکیب M-MLV با فعالیت ریبونوکلئازی کاهش‌یافته (Reduced RNase H) و پایداری حرارتی تا ۵۰ درجه سانتی‌گراد است که سنتز کارآمد رشته اول cDNA را برای اهداف با ساختار ثانویه پیچیده و تا طول فراتر از ۸ کیلوباز فراهم می‌آورد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
آنزیم ExcelRT™ Reverse Transcriptase کد RP1000 با غلظت ۲۰۰ واحد در میکرولیتر و ظرفیت کل ۲۰,۰۰۰ واحد (معادل ۱۰۰ واکنش ۲۰۰ واحدی) محصول کمپانی معتبر SMOBIO تایوان، یک DNA پلیمراز وابسته به RNA بر پایه ویروس لوکمی موشی مالونی نوترکیب (Recombinant M-MLV) است. این آنزیم به طور ویژه جهت رونویسی معکوس و سنتز رشته اول cDNA با بازده بالا از الگوهای Total RNA یا mRNA مهندسی شده است. از طریق اصلاح ساختار بیوشیمیایی، فعالیت ذاتی آنزیمی RNase H در این محصول به طور چشمگیری کاهش یافته است؛ در نتیجه، مولکول‌های الگوی RNA در طول فرآیند پلیمریزاسیون از تخریب زودهنگام محافظت شده و امکان تولید رونوشت‌های طویل با پردازش‌پذیری (Processivity) فوق‌العاده فراهم می‌گردد. ویژگی بارز دیگر این آنزیم، پایداری حرارتی ارتقایافته در بازه دمایی ۳۷ الی ۵۰ درجه سانتی‌گراد است؛ این قابلیت به پژوهشگر اجازه می‌دهد واکنش سنتز را در دمای ۵۰ درجه سانتی‌گراد اجرا نماید تا ساختارهای ثانویه متراکم (Hairpins) و نواحی سرشار از نوکلئوتیدهای GC به سادگی واسرشت شوند. با تکیه بر این ویژگی‌ها، سنتز پیوسته و یکدست قطعات cDNA تا بیش از ۸ کیلوباز (>8 kb) با بالاترین ضریب اطمینان میسر می‌شود. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی و مستقیم برند SMOBIO در ایران، اصالت صددرصدی کالا و رعایت دقیق استانداردهای زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
جهت سنتز رشته اول cDNA در حجم نهایی ۲۰ میکرولیتر، ابتدا در یک میکروتیوب عاری از RNase مقدار مناسب الگوی RNA (از ۱ نانوگرم تا ۵ میکروگرم Total RNA یا ۱ نانوگرم تا ۵۰۰ نانوگرم mRNA) را با پرایمر انتخابی (الیگو dT، هگزامر تصادفی یا پرایمر اختصاصی ژن) و مخلوط dNTPs ترکیب کرده و حجم را با آب مقطر عاری از نوکلئاز به ۱۰ میکرولیتر برسانید. مخلوط را به مدت ۵ دقیقه در دمای ۶۵ درجه سانتی‌گراد قرار دهید و بلافاصله به مدت حداقل ۱ دقیقه روی یخ منتقل نمایید تا ساختارهای فضایی RNA واسرشت شوند. سپس بافر اختصاصی واکنش، مهارکننده RNase (در صورت نیاز) و ۱ میکرولیتر از آنزیم ExcelRT™ Reverse Transcriptase (معادل ۲۰۰ واحد) را اضافه کرده و به آرامی با پیپت مخلوط کنید. در صورت استفاده از Random Hexamer، واکنش را ابتدا ۱۰ دقیقه در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد قرار داده و سپس انکوباسیون اصلی را در دمای ۴۲ الی ۵۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ الی ۵۰ دقیقه اجرا نمایید (دمای ۵۰ درجه برای الگوهای دارای ساختار ثانویه پیچیده توصیه می‌شود). در انتها، واکنش را با حرارت‌دهی در دمای ۸۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه خاتمه دهید.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول گزینه‌ای ایده‌آل برای سنتز رشته اول cDNA جهت استفاده مستقیم در واکنش‌های کمّی Real-Time RT-PCR (سنجش‌های qPCR مبتنی بر SYBR Green یا پروب‌های TaqMan)، واکنش‌های استاندارد End-point RT-PCR، کلونینگ رونوشت‌های با طول بلند (Long-range RT-PCR تا بیش از ۸ کیلوباز)، ساخت کتابخانه‌های cDNA و رونویسی معکوس از الگوهای دشوار و سرشار از ساختارهای ثانویه به شمار می‌رود.
شرایط نگهداری و پایداری
این آنزیم باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. با توجه به فرمولاسیون پایدار، این محصول در صورت رعایت زنجیره سرمایی و پرهیز از آلودگی‌های تصادفی با RNase تا ۲۴ ماه فعالیت زیستی و راندمان کاتالیزوری خود را حفظ می‌نماید. جهت تسهیل در مصرف روتین آزمایشگاهی و جلوگیری از آسیب‌های ناشی از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب، پیشنهاد می‌شود ویال پس از نخستین ذوب در مقادیر کاری مناسب آلیکوت گردد.