مسترمیکس هات استارت بی رنگ امپلیکون - میکس C
TEMPase HS PCR 2x Master Mix C- A230701-25
مستر میکس آماده ۲ برابری TEMPase Hot Start 2x Master Mix C (کد A230701-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک معرف همه‌کاره (All-in-one) حاوی آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase، سیستم بافری متوازن ترکیبی پتاسیم/آمونیوم (Combination Buffer)، مخلوط dNTPs و غلظت نهایی ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 است که اختصاصیت بالا، حساسیت استثنایی و چیدمان آسان واکنش در دمای اتاق را میسر می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف TEMPase Hot Start 2x Master Mix C با کد کاتالوگ A230701 (سایز ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای بهینه‌شده برای انجام انواع واکنش‌های تکثیر اختصاصی زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) است. این مستر میکس شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، سیستم بافری ترکیبی متوازن کلرید پتاسیم/سولفات آمونیوم (Combination Buffer)، مقادیر متعادل نوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP)، کلرید منیزیم (غلظت ۳ میلی‌مولار در مستر میکس معادل ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش) و پایدارکننده‌های اختصاصی می‌باشد. مکانیسم هات‌استارت در آنزیم TEMPase به واسطه اتصال یک گروه شیمیایی به جایگاه فعال آنزیم عمل می‌کند که فعالیت کاتالیزوری آن را در دمای اتاق به طور کامل مهار می‌نماید؛ در نتیجه، در طول مراحل آماده‌سازی و نخستین شیب حرارتی ترموسایکلر، هیچ‌گونه طویل‌سازی غیراختصاصی یا تشکیل پرایمر دایمر رخ نمی‌دهد. پس از مرحله فعال‌سازی اولیه در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، پیوند شیمیایی گسسته شده و آنزیم با راندمان و قدرت بالا فعال می‌گردد. سیستم بافری پیشرفته Combination Buffer تحمل واکنش را در برابر تغییرات دمای اتصال پرایمر بالا برده و سنتز محصولات با طول و ساختارهای مختلف را تسهیل می‌کند. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی و تأمین‌کننده محصولات کمپانی‌های معتبر بین‌المللی در ایران، اصالت کامل کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را برای دانشگاه‌ها، مراکز تحقیقاتی و آزمایشگاه‌های تشخیص مولکولی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس و محلول پرایمرها را از فریزر خارج کرده و پس از ذوب کامل، به خوبی مخلوط و اسپین کوتاه نمایید تا از تجمع نامتوازن نمک‌ها جلوگیری شود. اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر به ترتیب زیر ترکیب کنید:
مستر میکس TEMPase 2x: مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
محلول ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر از ۱.۵ میلی‌مولار، طبق جدول تنظیمی افزوده شود (مثلاً ۱ میکرولیتر برای رسیدن به ۲ میلی‌مولار)
آب گرید PCR: به میزان لازم تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۱ تا ۲۰۰ نانوگرم DNA ژنومی، ۰.۱ تا ۱ نانوگرم پلاسمید، یا ۱ تا ۱۰ نانوگرم DNA باکتریایی مخلوط را درون لوله‌ها تقسیم کرده و الگو را اضافه کنید. پروتکل حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. فعال‌سازی حرارتی آنزیم: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمر)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ الی ۹۰ ثانیه (سرعت پلیمریزاسیون حدود ۱۰۰۰ جفت‌باز در دقیقه) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این مستر میکس انتخابی ایده‌آل برای واکنش‌های PCR با اختصاصیت و حساسیت بسیار بالا، تکثیر الگوهای ژنومی پیچیده، آماده‌سازی واکنش‌ها در دمای اتاق (Room Temperature Setup)، تکثیر قطعات ژنی جهت کلونینگ و تعیین توالی، واکنش‌های چندگانه (Multiplex PCR) و رفع مشکل باندهای غیراختصاصی و پرایمر دایمرها است.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود و تا تاریخ انقضای مندرج بر روی لیبل پایدار است. همچنین می‌توان محصول را پس از اولین ذوب تا ۶ ماه در دمای یخچال (مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد) نگهداری کرد تا از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.