مسترمیکس هات استارت بی رنگ امپلیکون - میکس A
TEMPase HS PCR 2x Master Mix A- A230301-25
مستر میکس آماده ۲ برابری TEMPase Hot Start 2x Master Mix A (کد A230301-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، فرمولاسیونی همه‌کاره (All-in-one) شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase، بافر اختصاصی بر پایه سولفات آمونیوم (Ammonium Buffer System)، مقادیر متوازن dNTPs و غلظت نهایی ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 است که با حذف تکثیرهای غیراختصاصی، اختصاصیت حداکثری و امکان چیدمان واکنش در دمای اتاق را فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف TEMPase Hot Start 2x Master Mix A با کد کاتالوگ A230301 (سایز ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتری شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای بهینه‌شده جهت انجام واکنش‌های تکثیر اختصاصی زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) با حساسیت بسیار بالا است. این مستر میکس حاوی آنزیم هات‌استارت TEMPase Hot Start DNA Polymerase، بافر آمونیومی استاندارد (Ammonium Buffer System با pH 8.5 حاوی سولفات آمونیوم)، غلظت متعادل دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP)، کلرید منیزیم (غلظت ۳.۰ میلی‌مولار در مستر میکس معادل ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش) و پایدارکننده‌های اختصاصی می‌باشد. مکانیسم مهار هات‌استارت در آنزیم TEMPase از طریق اتصال یک پیوند شیمیایی به جایگاه فعال آنزیم حاصل شده است؛ این ساختار آنزیم را در دمای اتاق کاملاً غیرفعال نگه می‌دارد تا در طول مراحل آماده‌سازی اولیه و شیب حرارتی نخست، هیچ‌گونه اتصال غیراختصاصی پرایمر یا تشکیل پرایمر دایمر منجر به سنتز محصول ناخواسته نشود. پس از یک گام فعال‌سازی حرارتی در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، این گروه شیمیایی آزاد شده و آنزیم با قدرت کاتالیزوری کامل وارد چرخه تکثیر می‌گردد. وجه تمایز فرمولاسیون مستر میکس A در بهره‌گیری از بافر آمونیومی است؛ یون‌های آمونیوم با اعمال اثر برهم‌کنش ضعیف یونی، اتصال پرایمرها را تنها به جایگاه‌های کاملاً مکمل محدود ساخته و بدین ترتیب بالاترین سطح اختصاصیت (Specificity) را حتی در حضور الگوهای پیچیده و با پرایمرهای مستعد میس‌مچ به ارمغان می‌آورند. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان نماینده رسمی و تأمین‌کننده محصولات معتبر بین‌المللی در ایران، اصالت کامل این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را برای دانشگاه‌ها، مراکز پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی سراسر کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس و پرایمرها را پس از خروج از فریزر به طور کامل ذوب نموده و به خوبی مخلوط و سانتریفیوژ کوتاه نمایید تا از تمرکز موضعی نمک‌ها جلوگیری به عمل آید. اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر طبق جدول زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس TEMPase 2x Master Mix A: مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر از ۱.۵ میلی‌مولار طبق جدول تنظیمی افزوده شود (به عنوان مثال ۱ میکرولیتر برای دستیابی به ۲.۰ میلی‌مولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۱ تا ۲۰۰ نانوگرم DNA ژنومی، ۰.۱ تا ۱ نانوگرم پلاسمید، یا ۱ تا ۱۰ نانوگرم DNA باکتریایی مخلوط واکنش را به خوبی مخلوط کرده و الگو را به لوله‌ها بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر اجرا می‌شود: ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ الی ۹۰ ثانیه (بر مبنای سرعت استاندارد پلیمریزاسیون حدود ۱۰۰۰ جفت‌باز در دقیقه) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول به طور تخصصی برای واکنش‌های PCR نیازمند اختصاصیت فوق‌العاده بالا، حذف کامل باندهای غیراختصاصی و پرایمر دایمرها، تکثیر توالی‌های ژنومی با اتصال‌های متقاطع و غیردقیق، آماده‌سازی مخلوط واکنش در دمای اتاق، واکنش‌های چندگانه (Multiplex PCR)، و پروژه‌های تشخیصی و تحلیلی با میزان الگوی ورودی اندک به کار می‌رود.
شرایط نگهداری و پایداری
محصول باید برای نگهداری بلندمدت در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد قرار گیرد و تا تاریخ انقضای درج‌شده بر روی لیبل پایداری کامل دارد. همچنین می‌توان مستر میکس را پس از نخستین ذوب تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از افت کیفیت ناشی از انجماد و ذوب مکرر جلوگیری شود.