مسترمیکس پی سی آر مناسب نواحی غنی از GC - نوع 2
GC TEMPase 2x Master Mix II A332701-25
مستر میکس آماده ۲ برابری GC TEMPase 2x Master Mix II (کد A332701-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، فرمولاسیونی بهینه‌شده و اختصاصی شامل آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase، بافر GC Buffer II، ادجوانت و افزاینده اختصاصی (Enhancer)، مخلوط متوازن dNTPs و غلظت نهایی ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 است که برای تکثیر موفقیت‌آمیز، قوی و بدون افت توالی‌های دشوار DNA با درصد بالای GC طراحی شده است.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف GC TEMPase 2x Master Mix II با کد کاتالوگ A332701 (سایز ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر همه‌کاره (All-in-one) و فوق‌العاده کارآمد است که به طور تخصصی جهت غلبه بر چالش‌های تکثیر توالی‌های ژنومی با درصد بالای سیتوزین و گوانین (GC-rich DNA sequences) فرموله شده است. این محصول حاوی آنزیم هات‌استارت TEMPase Hot Start DNA Polymerase، بافر بهینه‌شده GC Buffer II، مواد افزاینده اختصاصی (Enhancer جهت تسهیل واسرشت‌سازی ساختارهای ثانویه و پایدار)، غلظت متعادل dNTPs و کلرید منیزیم (غلظت ۳.۰ میلی‌مولار در مستر میکس ۲ برابری معادل ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش) می‌باشد. آنزیم پلیمراز TEMPase از طریق یک پیوند شیمیایی در جایگاه فعال خود مهار شده است و در دمای اتاق کاملاً غیرفعال باقی می‌ماند؛ در نتیجه در زمان آماده‌سازی واکنش و تا رسیدن به نخستین مرحله واسرشت‌سازی، هیچ‌گونه تکثیر غیراختصاصی یا تشکیل پرایمر دایمر رخ نمی‌دهد. پس از مرحله فعال‌سازی اولیه در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، پیوند شیمیایی شکسته شده و آنزیم با فعالیت کاتالیزوری کامل آزاد می‌گردد. هم‌افزایی بافر GC Buffer II و ترکیبات Enhancer سبب ناپایداری پیوندهای هیدروژنی متراکم در ساختارهای سنجاق‌سری (Hairpins) نواحی غنی از GC شده و بازدهی و اختصاصیت تکثیر را در مقایسه با بافرهای معمول به طور چشمگیری ارتقا می‌دهد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات معتبر بین‌المللی در ایران، اصالت صددرصدی کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را برای دانشگاه‌ها، مراکز تشخیصی و پژوهشکده‌های ژنتیک کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس و پرایمرها را پس از خروج از فریزر به طور کامل ذوب نموده و پیش از مصرف به خوبی مخلوط و سانتریفیوژ کوتاه نمایید تا از تمرکز موضعی نمک‌ها جلوگیری شود. اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر طبق مقادیر زیر با هم ترکیب فرمایید:
مستر میکس GC TEMPase 2x Master Mix II: مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر از ۱.۵ میلی‌مولار، طبق جدول تنظیمی افزوده شود (مثلاً ۱ میکرولیتر برای دستیابی به ۲.۰ میلی‌مولار)
آب گرید PCR: به میزان لازم تا حجم نهایی
DNA الگو: ۵۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی مخلوط را درون لوله‌ها تقسیم کرده و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ ثانیه (جهت ذوب کامل پیوندهای محکم GC)
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۰ الی ۶۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمر)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۰ الی ۶۰ ثانیه (بر مبنای سرعت استاندارد پلیمریزاسیون حدود ۱۰۰۰ جفت‌باز در دقیقه) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این مستر میکس انتخابی تخصصی و ایده‌آل برای تکثیر توالی‌های دارای درجات گوناگون GC، تقویت ژن‌ها و پروموترهای سرشار از نوکلئوتیدهای سیتوزین و گوانین (CpG Islands)، ژنوتایپینگ الگوهای ژنومی انسانی، گیاهی و میکروبی با ساختار ثانویه پیچیده، تکثیر آمپلیکون‌های تشخیصی که در بافرهای استاندارد تکثیر نمی‌شوند، و آماده‌سازی واکنش‌ها در دمای اتاق است.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود و تا تاریخ انقضای درج‌شده بر روی لیبل پایدار باقی می‌ماند. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس مصرفی را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد تا از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.