مسترمیکس پی سی آر مناسب نواحی غنی از GC - نوع 1
GC TEMPase 2x Master Mix I A331701-25
مستر میکس آماده ۲ برابری GC TEMPase 2x Master Mix I (کد کاتالوگ A331701-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، فرمولاسیونی بهینه‌شده و اختصاصی حاوی آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase، بافر اختصاصی GC Buffer I، افزاینده بهینه (Enhancer)، مقادیر متوازن dNTPs و غلظت نهایی ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 است که برای تکثیر موفق، پایدار و قوی اهداف دشوار DNA با درجات مختلف تا درصدهای بسیار بالای GC طراحی شده است.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف GC TEMPase 2x Master Mix I با کد کاتالوگ A331701 (بسته‌بندی ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، واکنشی یکپارچه (All-in-one) و بهینه‌سازی‌شده است که اختصاصاً جهت تسهیل تکثیر توالی‌های دارای درصد بالای گوانین و سیتوزین (GC-rich DNA sequences) فرموله شده است. این محصول شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، بافر بهینه GC Buffer I، ترکیبات ادجوانت و افزاینده اختصاصی (Enhancer جهت سست کردن ساختارهای ثانویه مقاوم)، مخلوط متوازن دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (dNTPs) و کلرید منیزیم (غلظت ۳ میلی‌مولار در مستر میکس ۲ برابری معادل ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش) می‌باشد. در این فرمولاسیون، آنزیم TEMPase به واسطه اتصال یک گروه شیمیایی به جایگاه فعال خود، در دمای اتاق کاملاً غیرفعال باقی می‌ماند تا در طول مراحل چیدمان اولیه و نخستین شیب حرارتی، هیچ‌گونه اتصال غیراختصاصی پرایمر یا تشکیل پرایمر دایمر صورت نگیرد. پس از انکوباسیون فعال‌سازی اولیه در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، این اتصال شیمیایی آزاد شده و آنزیم با بالاترین سطح حساسیت، اختصاصیت و بازده عمل می‌کند. بافر ویژه GC Buffer I همراه با ترکیب Enhancer، شرایط ترمودینامیکی واسرشت‌سازی پیوندهای محکم سه‌گانه C-G و گسست ساختارهای سنجاق‌سری (Hairpin loops) را هموار ساخته و سبب تکثیر پایدار و شفاف اهداف ژنتیکی سرشار از GC می‌شود. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده رسمی محصولات معتبر بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت کامل زنجیره سرمایی نگهداری آن را برای مراکز علمی، دانشگاهی و آزمایشگاه‌های تخصصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال مستر میکس و پرایمرها را پس از خروج از فریزر به طور کامل ذوب نموده و پیش از مصرف به خوبی مخلوط و سانتریفیوژ کوتاه نمایید تا از تجمع نامتوازن نمک‌ها جلوگیری شود. اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر (یا مقیاس‌های کوچکتر متناسب نظیر ۲۵ میکرولیتر) طبق مقادیر زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس GC TEMPase 2x Master Mix I: مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پایه ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر طبق جدول ۱ تا ۶ میکرولیتر جهت رسیدن به ۲.۰ تا ۴.۵ میلی‌مولار افزوده شود)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۵۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی مخلوط واکنش را به آرامی با پیپت مخلوط کرده، درون تیوب‌ها تقسیم کنید و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ ثانیه (جهت ذوب کامل پیوندهای مقاوم C-G)
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۰ الی ۶۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۰ الی ۶۰ ثانیه (بر مبنای سرعت استاندارد حدود ۱۰۰۰ جفت‌باز در دقیقه) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای تکثیر الگوهای سرشار از نوکلئوتیدهای گوانین و سیتوزین (GC-rich)، جزایر CpG، توالی‌های پروموتری و اینترونی با ساختارهای ثانویه فشرده، ژنوتایپینگ الگوهای دشوار انسانی، جانوری، گیاهی و میکروارگانیسم‌های مقاوم، و رفع مشکل عدم تکثیر یا ایجاد اسمیر در بافرهای استاندارد PCR است.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد در فریزر نگهداری شود و تا تاریخ انقضای مندرج روی برچسب دارای پایداری کامل است. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد بدون آنکه کاهشی در فعالیت آنزیمی یا بازده تکثیر پدید آید.
راهنمای مقایسه و تمایز سری‌های GC TEMPase (Master Mix I vs. Master Mix II)
کمپانی Ampliqon دو فرمولاسیون مجزا شامل GC TEMPase I (حاوی GC Buffer I) و GC TEMPase II (حاوی GC Buffer II) ارائه می‌دهد. از آنجا که رفتار ترمودینامیکی و برهم‌کنش ساختاری توالی‌های غنی از GC به ماهیت الگو و موقعیت نوکلئوتیدها بستگی دارد، برخی اهداف ممکن است در فرمولاسیون I بازدهی و وضوح باند بالاتری ایجاد کنند و برخی دیگر با فرمولاسیون II پاسخ بهینه‌تری ارائه دهند. در اختیار داشتن هر دو گزینه امکان غربالگری و یافتن ایده آل‌ترین شرایط تکثیر را برای سخت‌ترین الگوها میسر می‌سازد.