مسترمیکس ریل تایم پروب تکمن - با راکس زیاد امپلیکون
2x Real Time PCR Master Mix for probe-High Rox A315402-25
مستر میکس ۲ برابری RealQ Plus 2x Master Mix Green, High ROX (کد کاتالوگ A325402 / A315402-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر آماده مصرف بر پایه رنگ متصل‌شونده به DNA (Green DNA dye) و آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase است که با حد تشخیص استثنایی ۱ کپی و غلظت بهینه‌سازی‌شده رنگ مرجع High ROX، سنجش‌های کمّی Real-Time PCR را در دستگاه‌های نیازمند های-راکس نظیر پلتفرم‌های StepOne و ABI با بالاترین حساسیت و اختصاصیت ممکن می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف RealQ Plus 2x Master Mix Green, High ROX با کد کاتالوگ تجاری A325402 (بسته‌بندی ۴۰۰ واکنش ۲۵ میکرولیتری شامل ۴ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک بسته تشخیصی و تحقیقاتی تک‌لوله‌ای (Single-tube) برای انجام سنجش‌های دقیق Real-Time PCR کمی بر پایه رنگ‌های فلورسنت متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (DNA-binding dye) است. این مستر میکس شامل آنزیم پلیمراز اختصاصی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، سیستم بافری ارتقایافته، غلظت بهینه نوکلئوتیدها (dNTPs)، رنگ فلورسنت سبز (Green dye) و رنگ مرجع داخلی High ROX می‌باشد. آنزیم هات‌استارت TEMPase به کمک یک پیوند شیمیایی در جایگاه فعال خود، در دمای اتاق کاملاً غیرفعال باقی می‌ماند؛ بدین ترتیب در طول مراحل ستاپ و نخستین شیب حرارتی، از تشکیل هرگونه پرایمر دایمر و تکثیرهای غیردقیق و زمینه‌ای ممانعت شده و پس از انکوباسیون اولیه در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، فعالیت آنزیم آزاد می‌گردد. ویژگی برجسته این مستر میکس، حساسیت فوق‌العاده با حد تشخیص (LOD) حدود ۱ کپی و حد سنجش کمّی (LOQ) حدود ۲۴ کپی ژنوم است. حضور غلظت بالای رنگ مرجع ROX (High ROX) امکان نرمال‌سازی نوسانات نوری حاصل از خطاهای پیپتینگ، تفاوت‌های اپتیکی چاهک‌ها یا تبخیر اندک را در دستگاه‌های سازگار فراهم می‌آورد. این محصول با تجهیزات استاندارد شرکت Applied Biosystems نظیر سیستم‌های StepOne، StepOnePlus و سری‌های قدیمی‌تر 7000، 7300 و 7900HT هماهنگی کامل دارد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات معتبر بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و حفظ دقیق زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
مستر میکس را روی یخ ذوب کرده و پیش از مصرف به آرامی مخلوط و اسپین کوتاه نمایید (جهت حفظ شدت فلورسانس رنگ سبز، ویال همواره دور از تابش مستقیم نور نگه داشته شود؛ از ورتکس شدید که سبب تولید حباب می‌گردد خودداری کنید). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۲۵ میکرولیتر به ترتیب زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس RealQ Plus 2x Green High ROX: مقدار ۱۲.۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر فوروارد (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر ریورس (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱ تا ۱۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی
لوله‌ها یا پلیت را به آرامی و بدون ایجاد حباب پیپت کرده و بلافاصله درون دستگاه قرار دهید.
پروتکل‌های حرارتی پیشنهادی:
پروتکل دومرحله‌ای (Two-step - پیشنهادی):
۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه)
۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ الی ۳۰ ثانیه
اتصال و امتداد (همراه با ثبت سیگنال فلورسانس): ۵۵ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶۰ ثانیه
۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض دستگاه
پروتکل سه‌مرحله‌ای (Three-step):
۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه)
۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه): واسرشت‌سازی در ۹۵ درجه (۱۵ تا ۳۰ ثانیه)، اتصال پرایمر در ۵۵ تا ۶۵ درجه (۳۰ ثانیه، همراه با خوانش فلورسانس) و طویل‌سازی در ۷۲ درجه (۳۰ ثانیه)
۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض نرم‌افزار دستگاه
بخش: راهنمای کنترل کیفیت و ارزیابی داده‌های سنجش (Evaluation Guideline)
ارزیابی منحنی استاندارد (Standard Curve): برای پذیرش کیفیت عملکرد مستر میکس، راندمان تکثیر (PCR Efficiency) باید بین ۹۰ الی ۱۱۰ درصد، ضریب رگرسیون خطی ($R^2$) برابر یا بزرگتر از ۰.۹۸ و انحراف معیار (Standard Deviation) تکرارها برابر یا کمتر از ۰.۲ باشد.
بررسی منحنی ذوب (Melt Curve Analysis): در سنجش‌های مبتنی بر رنگ متصل‌شونده، باید تنها یک پیک منفرد و تیز در دمای ذوب پیش‌بینی‌شده محصول ظاهر شود. ظاهر شدن پیک‌های اضافی نشان‌دهنده تکثیر غیراختصاصی یا تشکیل پرایمر دایمر است. در چاهک‌های کنترل عدم الگو (NTC) نباید هیچ پیکی در دمای ذوب محصول دیده شود؛ حضور سیگنال در NTCها در چرخه‌های زیر ۴۰ نشان‌دهنده آلودگی نمونه‌ها است.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای سنجش‌های کمّی بیان ژن (Gene Expression Profiling)، اندازه‌گیری میزان بار پاتوژن‌ها، اعتبارسنجی داده‌های توالی‌یابی نسل جدید (RNA-Seq Validation)، تعیین تعداد کپی ژن‌ها (Copy Number Variation)، آنالیز دقیق منحنی ذوب (Melt Curve Analysis) و کلیه آزمون‌های Real-Time PCR در دستگاه‌های نیازمند High ROX است.
شرایط نگهداری و پایداری
محصول باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد و دور از تابش نور نگهداری شود. پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس مصرفی را تا ۳ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.