مسترمیکس ریل تایم پروب تکمن - بدون راکس امپلیکون
2x Real Time PCR Master Mix for probe-No Rox A313402-25
مستر میکس ۲ برابری RealQ Plus 2x Master Mix Green, Without ROX (کد کاتالوگ A323402 / A313402-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، فرمولاسیونی آماده مصرف بر پایه رنگ فلورسنت متصل‌شونده به DNA (Green DNA dye) و پلیمراز هات‌استارت شیمیایی TEMPase است که با حد تشخیص ۱ کپی و عدم حضور رنگ مرجع ROX، انتخابی ایده‌آل و دقیق برای دستگاه‌های اپتیکی مستقل از ROX نظیر سامانه‌های Bio-Rad CFX و Roche LightCycler به شمار می‌رود.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف RealQ Plus 2x Master Mix Green, Without ROX با کد کاتالوگ تجاری A323402 (بسته‌بندی ۴۰۰ واکنش ۲۵ میکرولیتری شامل ۴ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای (Single-tube) برای اجرای سنجش‌های کمّی Real-Time PCR بر پایه رنگ‌های متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (Intercalating Green Dye) است. این مستر میکس شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، بافر بهینه‌سازی‌شده، مقادیر متوازن dNTPs و رنگ فلورسنت سبز اختصاصی است و فاقد رنگ مرجع داخلی ROX (No ROX) فرموله گردیده است. مکانیسم هات‌استارت در آنزیم TEMPase از طریق اتصال یک گروه شیمیایی به جایگاه فعال عمل می‌کند که مانع از پلیمریزاسیون در دمای محیط و شیب اولیه ترموسایکلر می‌شود؛ این مهار، تکثیرهای غیراختصاصی و پرایمر دایمرها را حذف کرده و پس از فعال‌سازی حرارتی ۱۵ دقیقه‌ای در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، فعالیت حداکثری آنزیم را آزاد می‌سازد. ویژگی برجسته این محصول، حساسیت استثنایی با حد تشخیص (LOD) حدود ۱ کپی و حد سنجش کمّی (LOQ) حدود ۲۴ کپی است. فرمولاسیون فاقد ROX این کیت اختصاصاً برای تجهیزات اپتیکی پیشرفته‌ای طراحی شده که نیازی به نرمال‌سازی با رنگ پسیو ندارند (از جمله دستگاه‌های کمپانی Bio-Rad سری CFX و پلتفرم‌های Roche سری LightCycler). شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
مستر میکس را روی یخ ذوب کرده و پیش از مصرف به آرامی مخلوط و اسپین کوتاه نمایید (جهت حفاظت از شدت نشر رنگ فلورسنت، ویال همواره دور از نور مستقیم نگهداری شود؛ از ورتکس شدید که باعث تولید حباب می‌گردد پرهیز کنید). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۲۵ میکرولیتر به ترتیب زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس RealQ Plus 2x Green Without ROX: مقدار ۱۲.۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر فوروارد (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر ریورس (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱ تا ۱۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی
مخلوط واکنش را به آرامی و بدون ایجاد حباب پیپت کرده و بلافاصله درون ترموسایکلر قرار دهید.
پروتکل‌های حرارتی استاندارد:
پروتکل دومرحله‌ای (Two-step - پیشنهادی):
۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه)
۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ الی ۳۰ ثانیه
اتصال و امتداد (همراه با ثبت فلورسانس): ۵۵ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶۰ ثانیه
۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض دستگاه
پروتکل سه‌مرحله‌ای (Three-step):
۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه)
۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه): واسرشت‌سازی در ۹۵ درجه (۱۵ تا ۳۰ ثانیه)، اتصال پرایمر در ۵۵ تا ۶۵ درجه (۳۰ ثانیه، همراه با خوانش فلورسانس) و طویل‌سازی در ۷۲ درجه (۳۰ ثانیه)
۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض دستگاه
بخش: راهنمای کنترل کیفیت و ارزیابی نتایج (Evaluation Guideline)
ارزیابی منحنی استاندارد (Standard Curve): برای تأیید کیفیت مستر میکس، راندمان تکثیر (PCR Efficiency) باید در بازه ۹۰ الی ۱۱۰ درصد، ضریب همبستگی خطی ($R^2$) برابر یا بالاتر از ۰.۹۸ و انحراف معیار تکرارها (Standard Deviation) کمتر یا مساوی ۰.۲ باشد.
تحلیل منحنی ذوب (Melt Curve): در سنجش‌های مبتنی بر رنگ متصل‌شونده، حضور یک تک‌پیک تیز در دمای ذوب پیش‌بینی‌شده محصول نشان‌دهنده اختصاصیت بالای تکثیر است. ظهور پیک‌های فرعی نشانگر تکثیر غیراختصاصی یا پرایمر دایمر خواهد بود. در چاهک‌های NTC (کنترل منفی فاقد الگو) نباید هیچ پیکی در دمای ذوب محصول مشاهده شود.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای سنجش‌های کمّی بیان ژن (Gene Expression Profiling)، سنجش بار ویروسی و باکتریایی، آنالیزهای اعتبارسنجی بیان در پروژه‌های RNA-Seq، ژنوتایپینگ بر پایه منحنی ذوب (Melt Curve Analysis) و کلیه آزمون‌های qPCR مبتنی بر رنگ سبز در پلتفرم‌های بدون نیاز به ROX است.
شرایط نگهداری و پایداری
مستر میکس باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد و در تاریکی نگهداری شود. پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس مصرفی را تا ۳ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد تا از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب جلوگیری شود.