مسترمیکس ریل تایم سایبرگرین - بدون راکس امپلیکون
2x Real Time PCR Master Mix Green-No Rox A323402-25
مستر میکس ۲ برابری RealQ Plus 2x Master Mix Green, Without ROX (کد کاتالوگ A323402 / A323402-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، فرمولاسیونی آماده مصرف بر پایه رنگ فلورسنت متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (Green DNA-binding dye) و آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase است که با حساسیت استثنایی با حد تشخیص ۱ کپی و عدم حضور رنگ مرجع پسیو ROX، سنجش‌های کمّی Real-Time PCR را در دستگاه‌های اپتیکی مستقل از ROX نظیر سیستم‌های Bio-Rad CFX و Roche LightCycler با اختصاصیت و تکرارپذیری بالا فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف RealQ Plus 2x Master Mix Green, Without ROX با کد کاتالوگ تجاری A323402 (بسته‌بندی ۴۰۰ واکنش ۲۵ میکرولیتری شامل ۴ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک بسته تشخیصی و تحقیقاتی تک‌لوله‌ای (Single-tube) برای اجرای دقیق و حساس سنجش‌های کمّی Real-Time PCR بر پایه رنگ‌های متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (DNA-binding dye) است. این مستر میکس حاوی آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، سیستم بافری بهینه‌سازی‌شده، غلظت متعادل دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (dNTPs) و رنگ فلورسنت سبز اختصاصی است و فاقد رنگ مرجع داخلی ROX (Without ROX / No ROX) فرموله شده است. به واسطه اتصال یک گروه شیمیایی به جایگاه فعال آنزیم TEMPase، این پلیمراز در دمای محیط و طی مراحل چیدمان واکنش کاملاً غیرفعال باقی می‌ماند؛ بدین ترتیب از اتصال‌های غیراختصاصی پرایمرها و تشکیل پرایمر دایمرها جلوگیری شده و پس از فعال‌سازی حرارتی اولیه در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، فعالیت آنزیم با راندمان کامل آغاز می‌شود. این محصول دارای حد تشخیص (LOD) حدود ۱ کپی و حد سنجش کمّی (LOQ) حدود ۲۴ کپی ژنوم است. فرمولاسیون فاقد ROX این کیت تطابق ایده‌آلی با پلتفرم‌های اپتیکی پیشرفته‌ای دارد که نیازی به کالیبراسیون نوری با رنگ مرجع پسیو ندارند (شامل سری‌های Bio-Rad CFX و Roche LightCycler). شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به آزمایشگاه‌های ژنتیک، پزشکی قانونی و مراکز تحقیقاتی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
مستر میکس را روی یخ ذوب کرده و پیش از مصرف به آرامی فیلیک و اسپین کوتاه نمایید (ویال را به دلیل حضور رنگ فلورسنت سبز دور از تابش مستقیم نور نگه دارید؛ از ورتکس شدید که سبب تشکیل حباب‌های مختل‌کننده بازخوانی فلورسانس می‌شود خودداری فرمایید). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۲۵ میکرولیتر به ترتیب زیر ترکیب کنید:
مستر میکس RealQ Plus 2x Green Without ROX: مقدار ۱۲.۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر فوروارد (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر ریورس (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱ تا ۱۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم)
مخلوط واکنش را به آرامی و بدون ایجاد حباب پیپت کرده و بلافاصله درون چاهک‌های پلیت یا میکروتیوب‌های qPCR منتقل نمایید.
برنامه‌های حرارتی پیشنهادی:
پروتکل دومرحله‌ای (Two-step - پیشنهادی):
۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه)
۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ الی ۳۰ ثانیه
اتصال و امتداد (همراه با ثبت سیگنال فلورسانس): ۵۵ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶۰ ثانیه
۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض نرم‌افزار دستگاه
پروتکل سه‌مرحله‌ای (Three-step):
۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه)
۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه): واسرشت‌سازی در ۹۵ درجه (۱۵ تا ۳۰ ثانیه)، اتصال پرایمر در ۵۵ تا ۶۵ درجه (۳۰ ثانیه، همراه با بازخوانی فلورسانس) و طویل‌سازی در ۷۲ درجه (۳۰ ثانیه)
۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض نرم‌افزار دستگاه
بخش: راهنمای ارزیابی کیفیت مستر میکس و نتایج (Evaluation Guideline)
ارزیابی منحنی استاندارد (Standard Curve): برای تأیید کیفیت ستاپ، راندمان واکنش (PCR Efficiency) باید در محدوده ۹۰ الی ۱۱۰ درصد، ضریب تبیین خطی ($R^2$) برابر یا بزرگتر از ۰.۹۸ و انحراف معیار تکرارها (Standard Deviation) کمتر یا مساوی ۰.۲ باشد.
بررسی منحنی ذوب (Melt Curve Analysis): در سنجش‌های مبتنی بر رنگ متصل‌شونده، باید تنها یک پیک منفرد و تیز در دمای ذوب هدف مورد نظر مشاهده شود. تشکیل پیک‌های اضافی بیانگر تکثیر غیراختصاصی یا پرایمر دایمر است. در چاهک‌های کنترل منفی فاقد الگو (NTC) نباید هیچ پیکی در دمای ذوب محصول تشکیل شود.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی استاندارد برای سنجش‌های کمّی بیان ژن (Gene Expression Profiling)، تایید و اعتبارسنجی داده‌های RNA-Seq، اندازه‌گیری بار عوامل بیماری‌زا (میکروبی و ویروسی)، آنالیزهای ژنوتایپینگ مبتنی بر منحنی ذوب و تمامی تست‌های Real-Time PCR در دستگاه‌های بدون نیاز به ROX است.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد و دور از تابش نور نگهداری شود. پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۳ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد تا از افت کارایی ناشی از فریز و دفریز مکرر جلوگیری شود.