مسترمیکس ریل تایم سایبرگرین - با راکس کم امپلیکون
2x Real Time PCR Master Mix Green-Low Rox A324402
مستر میکس ۲ برابری RealQ Plus 2x Master Mix Green, Low ROX (کد کاتالوگ A324402) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک معرف آماده مصرف با حساسیت فوق‌العاده و حد تشخیص ۱ کپی بر پایه رنگ فلورسنت متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (Green DNA dye) و آنزیم هات‌استارت TEMPase است که با غلظت کالیبره‌شده رنگ مرجع داخلی Low ROX، تکثیر کمی Real-Time PCR را در سیستم‌های نیازمند لو-راکس نظیر پلتفرم‌های ABI و Agilent با اختصاصیت بالا و کمترین زمینه ممکن می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف RealQ Plus 2x Master Mix Green, Low ROX با کد کاتالوگ A324402 (بسته‌بندی ۴۰۰ واکنش ۲۵ میکرولیتری شامل ۴ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک معرف تک‌لوله‌ای (Single-tube) بهینه‌سازی‌شده برای انجام سنجش‌های کمی و کیفی Real-Time PCR بر پایه رنگ‌های فلورسنت متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (Green DNA-binding dye) است. این مستر میکس حاوی کلیه اجزای لازم شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، سیستم بافری پیشرفته، مخلوط متوازن نوکلئوتیدها (dNTPs)، رنگ فلورسنت سبز و غلظت بهینه‌سازی‌شده از رنگ مرجع غیرفعال ROX (Low ROX) می‌باشد. آنزیم TEMPase به واسطه اتصال یک پیوند شیمیایی در جایگاه فعال کاتالیزوری خود، در دمای محیط و حین ستاپ واکنش کاملاً غیرفعال باقی می‌ماند؛ این مهار مانع از تشکیل پرایمر دایمرها و تکثیرهای غیراختصاصی در دمای اتاق شده و پس از انکوباسیون اولیه در ۹۵ درجه سانتی‌گراد، فعالیت حداکثری آن آزاد می‌گردد. این مستر میکس دارای حساسیت استثنایی با حد تشخیص (LOD) حدود ۱ کپی و حد سنجش کمّی (LOQ) حدود ۲۴ کپی است. غلظت Low ROX تعبیه‌شده در این محصول جهت نرمال‌سازی نوسانات نوری غیرمرتبط با واکنش (مانند خطاهای جزئی پیپتینگ و تفاوت اپتیکی چاهک‌ها) در دستگاه‌های نیازمند لو-راکس از جمله Applied Biosystems (مدل‌های 7500، 7500Fast، ViiA 7 و سری QuantStudio) و سامانه‌های Agilent (سری‌های Mx و AriaMx) بهینه‌سازی شده است. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
مستر میکس را روی یخ ذوب کرده و پیش از مصرف به آرامی فیلیک و اسپین کوتاه نمایید (ویال به دلیل داشتن رنگ فلورسنت سبز همواره دور از تابش مستقیم نور نگه داشته شود؛ از ورتکس شدید که سبب تولید حباب و اختلال در بازخوانی فلورسانس می‌شود خودداری فرمایید). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۲۵ میکرولیتر طبق مقادیر زیر ترکیب نمایید:
مستر میکس RealQ Plus 2x Green Low ROX: مقدار ۱۲.۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر فوروارد (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر ریورس (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان لازم تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱ تا ۱۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم) مخلوط واکنش را به آرامی بدون تولید حباب پیپت کرده و درون چاهک‌های پلیت یا میکروتیوب‌ها تقسیم کنید. پروتکل‌های حرارتی پیشنهادی: پروتکل دومرحله‌ای (Two-step - پیشنهادی): ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ الی ۳۰ ثانیه
اتصال و امتداد (همراه با ثبت سیگنال فلورسانس): ۵۵ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶۰ ثانیه ۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض نرم‌افزار دستگاه پروتکل سه‌مرحله‌ای (Three-step): ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه): واسرشت‌سازی در ۹۵ درجه (۱۵ تا ۳۰ ثانیه)، اتصال پرایمر در ۵۵ تا ۶۵ درجه (۳۰ ثانیه، همراه با خوانش فلورسانس) و طویل‌سازی در ۷۲ درجه (۳۰ ثانیه) ۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض دستگاه
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای سنجش‌های کمّی بیان ژن (Gene Expression Profiling)، اندازه‌گیری دقیق بار پاتوژن‌های ویروسی و باکتریایی، اعتبارسنجی بیان در پروژه‌های RNA-Seq، تعیین تعداد کپی ژن‌ها (CNV)، بررسی‌های ژنوتایپینگ مبتنی بر دمای ذوب و تمامی سنجش‌های qPCR مبتنی بر رنگ سبز در پلتفرم‌های مجهز به اپتیک Low ROX است.
شرایط نگهداری و پایداری
مستر میکس باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد و دور از تابش نور نگهداری شود. پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس مصرفی را تا ۳ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد تا از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.
راهنمای کنترل کیفیت و ارزیابی داده‌های سنجش
ارزیابی منحنی استاندارد (Standard Curve): برای پذیرش کیفیت عملکرد مستر میکس، راندمان تکثیر (PCR Efficiency) باید در بازه ۹۰ الی ۱۱۰ درصد، ضریب رگرسیون خطی ($R^2$) برابر یا بزرگتر از ۰.۹۸ و انحراف معیار تکرارها (Standard Deviation) برابر یا کمتر از ۰.۲ باشد.
بررسی منحنی ذوب (Melt Curve Analysis): در واکنش‌های مبتنی بر رنگ متصل‌شونده، باید تنها یک پیک مجزا و باریک در دمای ذوب هدف مورد نظر ظاهر شود. تشکیل هرگونه پیک دیگر نشان‌دهنده تکثیر غیراختصاصی یا پرایمر دایمر است. در چاهک‌های کنترل منفی بدون الگو (NTC) نباید پیکی در دمای ذوب محصول اختصاصی تشکیل گردد.