مسترمیکس ریل تایم سایبرگرین - با راکس زیاد امپلیکون
2x q PCR Master Mix Green-High Rox A325402-25
مستر میکس ۲ برابری RealQ Plus 2x Master Mix Green, High ROX (کد کاتالوگ تجاری A325402 / شناسه پک A325402-25) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک معرف آماده مصرف بر پایه رنگ فلورسنت متصل‌شونده به DNA و آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase است که با حد تشخیص ۱ کپی ژنوم و غلظت کالیبره‌شده رنگ مرجع High ROX، بالاترین حساسیت و تکرارپذیری را در پلتفرم‌های qPCR نیازمند های-راکس نظیر دستگاه‌های Applied Biosystems فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف RealQ Plus 2x Master Mix Green, High ROX با کد کاتالوگ A325402 (بسته‌بندی ۴۰۰ واکنش ۲۵ میکرولیتری شامل ۴ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای (Single-tube) فوق‌العاده حساس برای سنجش‌های کمّی Real-Time PCR مبتنی بر رنگ‌های فلورسنت متصل‌شونده به DNA دو‌رشته‌ای (DNA-binding dye) است. این مستر میکس شامل آنزیم پلیمراز هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase Hot Start DNA Polymerase، سیستم بافری بهینه‌سازی‌شده، مقادیر متوازن dNTPs، رنگ فلورسنت سبز اختصاصی و غلظت استاندارد رنگ مرجع غیرفعال High ROX می‌باشد. آنزیم TEMPase به واسطه اتصال گروه شیمیایی به جایگاه کاتالیزوری فعال خود، در دمای اتاق کاملاً مهار شده است؛ این ویژگی مانع از تشکیل پرایمر دایمرها و امتداد پرایمرهای متصل‌شده به جایگاه‌های غیراختصاصی در مراحل چیدمان اولیه و نخستین شیب حرارتی می‌شود. پس از یک مرحله فعال‌سازی حرارتی ۱۵ دقیقه‌ای در ۹۵ درجه سانتی‌گراد، فعالیت آنزیم آزاد شده و تکثیر با بیشترین اختصاصیت آغاز می‌گردد. حساسیت این معرف به حدی است که حد تشخیص (LOD) آن به ۱ کپی از ژن هدف و حد سنجش کمّی (LOQ) آن به حدود ۲۴ کپی (~۰.۰۸ نانوگرم DNA ژنومی انسان) می‌رسد. سطح رنگ مرجع High ROX در این محصول برای جبران خطاهای اپتیکی، نوسانات جزئی پیپتینگ و تبخیرهای احتمالی در دستگاه‌هایی نظیر Applied Biosystems StepOne، StepOnePlus، 7300 و 7900HT کالیبره شده است. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده رسمی محصولات معتبر بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت کامل زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
مستر میکس را روی یخ ذوب کرده و پیش از مصرف به آرامی فیلیک و اسپین کوتاه نمایید (جهت حفظ ساختار فلوروفور رنگ سبز، ویال همواره دور از تابش مستقیم نور نگهداری شود؛ از ورتکس شدید که موجب ایجاد حباب و خطای خوانش اپتیکی می‌گردد خودداری فرمایید). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۲۵ میکرولیتر به ترتیب زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس RealQ Plus 2x Green High ROX: مقدار ۱۲.۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
پرایمر فوروارد (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر ریورس (۱۰ میکرومولار): ۰.۵ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۲۵ تا ۲ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱ تا ۱۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی مخلوط واکنش را به آرامی پیپت کرده و بلافاصله درون چاهک‌های پلیت یا میکروتیوب‌های دستگاه qPCR قرار دهید. برنامه‌های حرارتی پیشنهادی: پروتکل دومرحله‌ای (Two-step - پیشنهادی): ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ الی ۳۰ ثانیه
اتصال و امتداد (همراه با ثبت فلورسانس): ۵۵ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶۰ ثانیه ۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض دستگاه پروتکل سه‌مرحله‌ای (Three-step): ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۴۰ چرخه): واسرشت‌سازی در ۹۵ درجه (۱۵ تا ۳۰ ثانیه)، اتصال پرایمر در ۵۵ تا ۶۵ درجه (۳۰ ثانیه، همراه با ثبت فلورسانس) و طویل‌سازی در ۷۲ درجه (۳۰ ثانیه) ۳. آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve): طبق تنظیمات پیش‌فرض نرم‌افزار دستگاه
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی استاندارد برای سنجش‌های کمّی بیان ژن (Gene Expression Profiling)، تعیین میزان بار پاتوژن‌های باکتریایی و ویروسی، تأیید نتایج RNA-Seq، ارزیابی تغییرات تعداد کپی ژن (CNV)، بررسی‌های ژنوتایپینگ بر پایه منحنی ذوب و کلیه سنجش‌های qPCR مبتنی بر رنگ سبز در تجهیزات نیازمند High ROX است.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد و دور از تابش نور نگهداری شود. پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس مصرفی را تا ۳ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.
راهنمای کنترل کیفیت و ارزیابی داده‌ها
ارزیابی منحنی استاندارد (Standard Curve): برای پذیرش کیفیت عملکرد مستر میکس، راندمان تکثیر (PCR Efficiency) باید در بازه ۹۰ الی ۱۱۰ درصد، ضریب رگرسیون خطی ($R^2$) بزرگتر یا مساوی ۰.۹۸ و انحراف معیار تکرارها (Standard Deviation) کمتر یا مساوی ۰.۲ باشد.
بررسی منحنی ذوب (Melt Curve Analysis): در واکنش‌های مبتنی بر رنگ متصل‌شونده به DNA، تشکیل یک پیک مجزا و واضح در دمای ذوب مورد انتظار محصول نشانه اختصاصیت بالای واکنش است. حضور پیک‌های فرعی نشانگر تکثیر غیراختصاصی یا پرایمر دایمر خواهد بود. در چاهک‌های NTC (کنترل منفی فاقد الگو) نباید هیچ پیکی در دمای ذوب محصول اختصاصی ظاهر شود.