مسترمیکس هات استارت آبی امپلیکون
2x Hot start PCR Master Mix Blue 290401-50
مستر میکس آماده ۲ برابری TEMPase Hot Start 2x Master Mix A BLUE (کد کاتالوگ A290401 / شناسه پک A290401-50) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک فرمولاسیون همه‌کاره (All-in-one) شامل آنزیم هات‌استارت اصلاح‌شده شیمیایی TEMPase، بافر استاندارد آمونیومی، مخلوط متوازن dNTPs، غلظت نهایی ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 و رنگ ردیاب آبی خنثی (Inert Blue Dye) است که بارگذاری مستقیم محصول PCR بر روی ژل آگارز را بدون نیاز به بافر بارگذاری مجزا میسر می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف TEMPase Hot Start 2x Master Mix A BLUE با کد کاتالوگ A290401 (بسته‌بندی ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای بهینه‌سازی‌شده برای انجام واکنش‌های دقیق زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) با اختصاصیت و راحتی کاربری بالا است. این مستر میکس حاوی آنزیم پلیمراز هات‌استارت TEMPase Hot Start DNA Polymerase، بافر استاندارد بر پایه سولفات آمونیوم (Ammonium Buffer System با pH 8.5)، غلظت متعادل دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP در مستر میکس ۲ برابری)، کلرید منیزیم (غلظت ۳ میلی‌مولار در مستر میکس معادل ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، مواد پایدارکننده و رنگ آبی خنثی (Inert Blue Dye) به عنوان لودینگ دای داخلی می‌باشد. آنزیم TEMPase از طریق اتصال یک گروه شیمیایی به جایگاه فعال کاتالیزوری در دمای محیط مهار شده است؛ در نتیجه در زمان ستاپ و طی شیب حرارتی اولیه، هیچ‌گونه تکثیر غیراختصاصی یا تشکیل پرایمر دایمر رخ نمی‌دهد و پس از مرحله فعال‌سازی اولیه در دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد، فعالیت آنزیم آزاد می‌گردد. مزیت کاربردی نسخه BLUE، عدم نیاز به افزودن بافر بارگذاری مجزا (Loading Dye) پس از پایان PCR است؛ کاربر می‌تواند بخشی از محصول نهایی را مستقیماً درون چاهک ژل آگارز لود کند. جبهه رنگ آبی در ژل آگارز ۰.۵ تا ۱.۵ درصد هم‌تراز با قطعات ۴۰۰ تا ۵۰۰ جفت‌باز حرکت کرده و پایش چشمی الکتروفورز را تسهیل می‌نماید. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی این کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال مستر میکس و پرایمرها را پس از خروج از فریزر به طور کامل ذوب نموده و پیش از مصرف به خوبی مخلوط و اسپین کوتاه نمایید تا از تجمع نامتوازن نمک‌ها جلوگیری شود (به دلیل ماهیت هات‌استارت آنزیم، آماده‌سازی واکنش در دمای اتاق امکان‌پذیر است). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر طبق جدول زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس TEMPase 2x Master Mix A BLUE: مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پایه ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر، طبق جدول ۱ تا ۶ میکرولیتر جهت دستیابی به ۲.۰ تا ۴.۵ میلی‌مولار افزوده شود)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۲۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱ تا ۲۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم) مخلوط واکنش را به آرامی با پیپت مخلوط کرده، درون میکروتیوب‌ها تقسیم کنید و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. فعال‌سازی حرارتی اولیه آنزیم: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ الی ۹۰ ثانیه (بر مبنای سرعت استاندارد حدود ۱۰۰۰ جفت‌باز در دقیقه) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
پس از اتمام واکنش، محصول را بدون نیاز به افزودن لودینگ دای، مستقیماً بر روی ژل آگارز بارگذاری نمایید.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای واکنش‌های PCR نیازمند اختصاصیت بالا، حذف باندهای غیراختصاصی و پرایمر دایمرها، غربالگری‌های غربالگری کلونی (Colony PCR)، ژنوتایپینگ روتین، بررسی قطعات ژنی جهت الکتروفورز سریع ژل، و کلیه فرآیندهایی است که بارگذاری مستقیم و بدون واسطه بر روی ژل، سرعت و دقت کار آزمایشگاهی را افزایش می‌دهد.
شرایط نگهداری و پایداری
محصول برای نگهداری بلندمدت باید در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد قرار گیرد و تا تاریخ انقضای مندرج بر روی برچسب دارای پایداری کامل است. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از افت کیفیت ناشی از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.