مسترمیکس پی سی آر بی رنگ امپلیکون Mgcl2:2 mM
2x PCR Master Mix- Mgcl2:2 mM 150301-50
مستر میکس آماده ۲ برابری Taq DNA Polymerase 2x Master Mix با غلظت نهایی ۲ میلی‌مولار MgCl2 (کد کاتالوگ A150301 / شناسه پک 150301-50) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، فرمولاسیونی همه‌کاره و آماده مصرف بر پایه سیستم بافری آمونیومی (+NH4)، مخلوط متوازن dNTPs و آنزیم Ampliqon Taq Polymerase است که با کاهش زمان آماده‌سازی و افزایش بازدهی تکثیر، استانداردی مطمئن را برای انواع واکنش‌های روتین PCR فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف Taq DNA Polymerase 2x Master Mix (2 mM MgCl2) با کد کاتالوگ A150301 (بسته‌بندی ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای بهینه‌شده برای انجام سریع و تکرارپذیر انواع واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) است. این مستر میکس حاوی آنزیم باکیفیت Ampliqon Taq DNA Polymerase، سیستم بافری استاندارد بر پایه یون‌های آمونیوم (Ammonium Buffer System با pH 8.5)، غلظت متعادل دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP در مستر میکس ۲ برابری معادل ۰.۲ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، کلرید منیزیم (غلظت ۴ میلی‌مولار در مستر میکس معادل ۲.۰ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، مواد پایدارکننده و دترجنت 0.2% Tween 20 می‌باشد. غلظت پایه ۲ میلی‌مولار منیزیم در این مستر میکس به طور اختصاصی برای پرایمرها یا الگوهایی تنظیم شده است که به غلظت یونی بالاتری نسبت به حالت معمول (۱.۵ میلی‌مولار) جهت اتصال پایدارتر و بازده تکثیر بیشتر نیاز دارند. سیستم بافری آمونیومی واکنش را در برابر نوسانات دمای اتصال پرایمر منعطف ساخته و تشکیل باندهای غیراختصاصی را مهار می‌کند. آماده مصرف بودن (Ready-to-use) این مستر میکس مراحل دستکاری و پیپتینگ معرف‌ها را به حداقل رسانده، خطر آلودگی متقاطع را رفع کرده و تکرارپذیری نتایج آزمایشگاهی را ارتقا می‌دهد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی کالا و سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس و محلول‌های پرایمر را از فریزر خارج کرده و پس از ذوب کامل، به خوبی تکان داده و سانتریفیوژ کوتاه نمایید تا از تجمع نامتوازن نمک‌ها جلوگیری شود (تمامی ترکیبات در حین آماده‌سازی روی یخ نگهداری شوند). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر (یا ۲۵ میکرولیتر با مقیاس نصف) به ترتیب زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس Taq 2x Master Mix (2 mM MgCl2): مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پایه ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر، طبق جدول ۱ تا ۵ میکرولیتر جهت رسیدن به ۲.۵ تا ۴.۵ میلی‌مولار افزوده شود)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۵۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم) مخلوط واکنش را به آرامی پیپت کرده، در میکروتیوب‌ها تقسیم کنید و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. واسرشت‌سازی اولیه: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲ الی ۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ ثانیه (برای اهداف زیر ۱ کیلوباز؛ برای اهداف بلندتر بر مبنای ۱ دقیقه به ازای هر کیلوباز) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی استاندارد برای انواع واکنش‌های معمول PCR، غربالگری کلونی‌ها (Colony PCR)، بررسی محصولات هضم آنزیمی، ژنوتایپینگ تشخیصی و تحقیقاتی، تکثیر قطعات ژنی جهت کلونینگ و تعیین توالی، و کلیه سنجش‌هایی است که واکنش به غلظت منیزیم بالاتر از ۱.۵ میلی‌مولار برای افزایش شدت باند و کارایی بهتر نیاز دارد.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد حفظ شود و تا تاریخ انقضای مندرج بر روی لیبل پایدار است. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از آسیب‌های ناشی از انجماد و ذوب مکرر جلوگیری شود.