مسترمیکس پی سی آر بی رنگ امپلیکون Mgcl2:1.5 mM
2x PCR Master Mix- Mgcl2:1.5 mM 140301-50
مستر میکس آماده ۲ برابری Taq DNA Polymerase 2x Master Mix با غلظت ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 (کد کاتالوگ A140301 / شناسه پک 140301-50) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر آماده مصرف و بهینه‌سازی‌شده بر پایه سیستم بافری آمونیومی (+NH4)، مخلوط متوازن dNTPs و آنزیم Ampliqon Taq Polymerase است که با کاهش مراحل هندلینگ و به حداقل رساندن ریسک آلودگی، نتایجی تکرارپذیر، پایدار و با بازده بالا را در واکنش‌های روتین PCR فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف Taq DNA Polymerase 2x Master Mix (1.5 mM MgCl2) با کد کاتالوگ تجاری A140301 (بسته‌بندی ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک معرف تک‌لوله‌ای (All-in-one) برای اجرای سریع، آسان و استاندارد انواع واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) است. این مستر میکس شامل آنزیم فعال Ampliqon Taq DNA Polymerase، سیستم بافری استاندارد بر پایه یون‌های آمونیوم (Ammonium Buffer System با ترکیب Tris-HCl pH 8.5 و سولفات آمونیوم)، غلظت متعادل دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP در مستر میکس ۲ برابری معادل ۰.۲ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، کلرید منیزیم (غلظت ۳ میلی‌مولار در مستر میکس معادل غلظت استاندارد ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، ترکیبات پایدارکننده و دترجنت 0.2% Tween 20 می‌باشد. سیستم بافری آمونیومی در این محصول دامنه دمای اتصال پرایمرها را وسیع‌تر کرده و از اتصالات ضعیف و نامناسب جلوگیری می‌کند؛ در نتیجه اختصاصیت و تفکیک باندها نسبت به بافرهای سنتی پتاسیمی به شکل چشمگیری بهبود می‌یابد. آماده به مصرف بودن (Ready-to-use) این مستر میکس، نیاز به اختلاط جداگانه اجزا را برطرف نموده، خطاهای ناشی از پیپتینگ مکرر را حذف کرده و ریسک آلودگی متقاطع بین استوک‌ها را به صفر می‌رساند. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی کالا و سلامت کامل زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس و محلول پرایمرها را از فریزر خارج کرده و پس از ذوب کامل، به خوبی مخلوط و سانتریفیوژ کوتاه نمایید تا از تمرکز موضعی نمک‌ها جلوگیری شود (تمام اجزا در حین آماده‌سازی روی یخ نگهداری شوند). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر (یا ۲۵ میکرولیتر با مقیاس نصف) طبق جدول زیر با یکدیگر ترکیب فرمایید:
مستر میکس Taq 2x Master Mix (1.5 mM MgCl2): مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پایه ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر، طبق جدول ۱ تا ۶ میکرولیتر جهت دستیابی به ۲.۰ تا ۴.۵ میلی‌مولار افزوده شود)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۵۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم) مخلوط واکنش را به آرامی پیپت کرده، درون لوله‌ها تقسیم نموده و الگو را اضافه کنید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. واسرشت‌سازی اولیه: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲ الی ۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ ثانیه (برای اهداف زیر ۱ کیلوباز؛ برای اهداف بلندتر بر مبنای ۱ دقیقه به ازای هر کیلوباز) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه)
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای تمامی واکنش‌های روتین PCR، سنجش‌های ژنوتایپینگ، غربالگری کلونی‌ها (Colony PCR)، بررسی محصولات هضم آنزیمی، تکثیر قطعات DNA جهت کلونینگ و ساب‌کلونینگ، تولید قطعات برای توالی‌یابی، و فرآیندهای تحقیقاتی نیازمند غلظت استاندارد ۱.۵ میلی‌مولار منیزیم است.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید همواره در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود و تا تاریخ انقضای مندرج روی برچسب دارای پایداری و راندمان کامل است. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد در یخچال نگهداری کرد تا از آسیب‌های ناشی از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب ممانعت به عمل آید.