مسترمیکس پی سی آر قرمز رنگ امپلیکون Mgcl2:2 mM
2x PCR Master Mix Red - Mgcl2:2 mM 190301-50
مستر میکس آماده ۲ برابری Taq DNA Polymerase 2x Master Mix RED با غلظت نهایی ۲ میلی‌مولار MgCl2 (کد کاتالوگ A190301 / شناسه پک 190301-50) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر آماده مصرف حاوی آنزیم Ampliqon Taq DNA Polymerase، بافر استاندارد آمونیومی (+NH4)، دئوکسی‌نوکلئوتیدها و رنگ ردیاب قرمز خنثی (Inert Red Dye) است که امکان بارگذاری مستقیم محصول PCR بر روی ژل آگارز را بدون نیاز به بافر لودینگ مجزا فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف Taq DNA Polymerase 2x Master Mix RED (2 mM MgCl2) با کد کاتالوگ A190301 (بسته‌بندی ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای بهینه‌شده برای انجام سریع، آسان و تکرارپذیر واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) همراه با امکان بارگذاری مستقیم روی ژل است. این مستر میکس حاوی آنزیم فعال Ampliqon Taq DNA Polymerase، سیستم بافری استاندارد بر پایه یون‌های آمونیوم (Ammonium Buffer System با pH 8.5)، غلظت متوازن دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP در مستر میکس ۲ برابری معادل ۰.۲ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، کلرید منیزیم (غلظت ۴ میلی‌مولار در مستر میکس معادل ۲.۰ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، مواد پایدارکننده و رنگ ردیاب قرمز خنثی (Inert Red Dye) به عنوان لودینگ دای داخلی می‌باشد. غلظت پایه ۲ میلی‌مولار منیزیم به طور ویژه برای واکنش‌هایی تنظیم شده که نیازمند اتصال پایدارتر پرایمر و بازده تکثیر بیشتر در مقایسه با غلظت معمول ۱.۵ میلی‌مولار هستند. حضور رنگ قرمز اختصاصی نیاز به تهیه و افزودن بافر بارگذاری مجزا (Loading Dye) را پس از اتمام فرآیند PCR کاملاً برطرف می‌سازد؛ اپراتور می‌تواند بخشی از محصول تکثیر را مستقیماً درون چاهک ژل آگارز لود نماید. جبهه این رنگ در ژل آگارز ۰.۵ تا ۱.۵ درصد در محدوده ۳۰۰ تا ۱۰۰۰ جفت‌باز حرکت می‌کند و پایش دقیق چشمی الکتروفورز را تسهیل می‌بخشد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان تأمین‌کننده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی کالا و حفظ کیفیت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به جامعه دانشگاهی، پژوهشی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس Taq 2x Master Mix RED و محلول‌های پرایمر را از فریزر خارج کرده و پس از ذوب کامل، به خوبی تکان داده و اسپین کوتاه نمایید تا از تمرکز موضعی نمک‌ها ممانعت به عمل آید (ترکیبات در حین آماده‌سازی روی یخ قرار گیرند). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر (یا ۲۰ میکرولیتر با مقیاس ۱۰ میکرولیتر مستر میکس) طبق جدول زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس Taq 2x Master Mix RED (2 mM MgCl2): مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پایه ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر، طبق جدول ۱ تا ۵ میکرولیتر جهت رسیدن به ۲.۵ تا ۴.۵ میلی‌مولار افزوده شود)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۵۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم) مخلوط واکنش را به آرامی پیپت کرده، درون لوله‌ها تقسیم نموده و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. واسرشت‌سازی اولیه: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲ الی ۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ ثانیه (برای اهداف زیر ۱ کیلوباز؛ برای اهداف بلندتر بر مبنای ۱ دقیقه به ازای هر کیلوباز) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه) پس از پایان برنامه ترموسایکلر، بدون نیاز به افزودن رنگ لودینگ، حجم مورد نظر از محصول (مثلاً ۱۰ میکرولیتر) را مستقیماً بر روی ژل آگارز لود نمایید.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای واکنش‌های روتین PCR، غربالگری کلونی‌ها (Colony PCR)، ژنوتایپینگ، تأیید صحت قطعات کلونینگ، بررسی محصولات هضم آنزیمی، و کلیه آزمایش‌هایی است که نیازمند غلظت منیزیم ۲ میلی‌مولار و بارگذاری سریع و مستقیم بر روی ژل آگارز هستند.
شرایط نگهداری و پایداری
برای نگهداری بلندمدت، محصول باید در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد در فریزر نگهداری شود و تا تاریخ انقضای مندرج روی برچسب دارای پایداری کامل است. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد تا از افت کیفیت ناشی از فریز و دفریز مکرر جلوگیری شود.