مسترمیکس پی سی آر قرمز رنگ امپلیکون Mgcl2:1.5 mM
2X PCR Master Mix Red - Mgcl2:1.5 mM 180301-50
مستر میکس آماده ۲ برابری Taq DNA Polymerase 2x Master Mix RED با غلظت نهایی ۱.۵ میلی‌مولار MgCl2 (کد کاتالوگ A180301 / شناسه پک 180301-50) محصول کمپانی Ampliqon دانمارک، یک فرمولاسیون آماده مصرف و بهینه‌سازی‌شده شامل آنزیم Ampliqon Taq DNA Polymerase، بافر استاندارد آمونیومی (+NH4)، مخلوط متوازن dNTPs و رنگ ردیاب قرمز خنثی (Inert Red Dye) است که امکان بارگذاری مستقیم محصول PCR بر روی ژل آگارز را بدون نیاز به بافر لودینگ مجزا فراهم می‌سازد.
تماس با کارشناسان
تیم تخصصی ما آماده پاسخگویی
توضیحات محصول
مستر میکس آماده مصرف Taq DNA Polymerase 2x Master Mix RED (1.5 mM MgCl2) با کد کاتالوگ A180301 (بسته‌بندی ۱۰۰ واکنش ۵۰ میکرولیتر، شامل ۲ ویال ۱.۲۵ میلی‌لیتری) محصول کمپانی معتبر Ampliqon دانمارک، یک واکنش‌گر تک‌لوله‌ای بهینه‌شده جهت انجام سریع، دقیق و با تکرارپذیری بالای انواع واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) همراه با امکان بارگذاری مستقیم روی ژل است. این مستر میکس حاوی آنزیم فعال Ampliqon Taq DNA Polymerase، سیستم بافری استاندارد بر پایه یون‌های آمونیوم (Ammonium Buffer System با pH 8.5 شامل Tris-HCl و سولفات آمونیوم)، غلظت متعادل دئوکسی‌ریبونوکلئوتیدها (۰.۴ میلی‌مولار از هر dNTP در مستر میکس ۲ برابری معادل ۰.۲ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، کلرید منیزیم (غلظت ۳ میلی‌مولار در مستر میکس ۲ برابری معادل غلظت استاندارد ۱.۵ میلی‌مولار نهایی در واکنش)، ترکیبات پایدارکننده، دترجنت 0.2% Tween 20 و رنگ ردیاب قرمز خنثی (Inert Red Dye) به عنوان لودینگ دای داخلی می‌باشد. سیستم بافری آمونیومی اختصاصیت اتصال پرایمرها را ارتقا داده و از ایجاد اتصالات ضعیف و باندهای غیراختصاصی ممانعت می‌نماید. ویژگی برجسته نسخه RED، حذف کامل نیاز به تهیه یا افزودن بافر بارگذاری مجزا (Loading Dye) پس از پایان فرآیند تکثیر است؛ به گونه‌ای که کاربر می‌تواند حجمی از محصول واکنش را مستقیماً درون چاهک ژل آگارز تزریق کند. جبهه رنگ قرمز در ژل آگارز ۰.۵ تا ۱.۵ درصد هم‌تراز با قطعات ۳۰۰ تا ۱۰۰۰ جفت‌باز حرکت نموده و پایش دیداری الکتروفورز را بسیار آسان می‌سازد. شرکت زیست‌فناوری پیشگام به‌عنوان ارائه‌دهنده رسمی محصولات بیولوژی مولکولی در ایران، اصالت صددرصدی کالا و حفظ سلامت زنجیره سرمایی نگهداری آن را تا تحویل نهایی به پژوهشگران، مراکز دانشگاهی و آزمایشگاه‌های تشخیصی کشور تضمین می‌نماید.
راهنمای راه‌اندازی واکنش و پروتکل حرارتی
ویال‌های مستر میکس Taq 2x Master Mix RED و محلول‌های پرایمر را از فریزر خارج کرده و پس از ذوب کامل، به خوبی تکان داده و اسپین کوتاه نمایید تا از تمرکز موضعی نمک‌ها ممانعت به عمل آید (ترکیبات در طول آماده‌سازی روی یخ قرار گیرند). اجزای واکنش را برای حجم نهایی ۵۰ میکرولیتر (یا ۲۰ میکرولیتر با مقیاس ۱۰ میکرولیتر مستر میکس) طبق جدول زیر ترکیب فرمایید:
مستر میکس Taq 2x Master Mix RED (1.5 mM MgCl2): مقدار ۲۵ میکرولیتر (غلظت نهایی 1X)
استوک ۲۵ میلی‌مولار MgCl2: در حالت پایه ۰ میکرولیتر (در صورت نیاز به غلظت‌های بالاتر، طبق جدول ۱ تا ۶ میکرولیتر جهت رسیدن به ۲.۰ تا ۴.۵ میلی‌مولار افزوده شود)
پرایمر A (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
پرایمر B (۱۰ میکرومولار): ۱ میکرولیتر (بازه پیشنهادی ۰.۵ تا ۵ میکرولیتر، غلظت نهایی ۰.۲ میکرومولار)
آب گرید PCR: به میزان کافی تا رسیدن به حجم نهایی
DNA الگو: ۵۰ نانوگرم DNA ژنومی (بازه ۱۰ تا ۵۰۰ نانوگرم)، ۰.۵ نانوگرم پلاسمید (۰.۱ تا ۱ نانوگرم)، یا ۵ نانوگرم DNA باکتریایی (۱ تا ۱۰ نانوگرم) مخلوط واکنش را به آرامی با پیپت مخلوط نموده، در لوله‌ها تقسیم کرده و DNA الگو را بیفزایید. برنامه حرارتی سه‌مرحله‌ای ترموسایکلر به شرح زیر تنظیم می‌شود: ۱. واسرشت‌سازی اولیه: دمای ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲ الی ۵ دقیقه (۱ چرخه) ۲. چرخه‌های تکثیر (۲۵ الی ۳۵ چرخه):
واسرشت‌سازی: ۹۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۳۰ ثانیه
اتصال پرایمرها: ۵۰ الی ۶۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه (معمولاً ۳ تا ۵ درجه پایین‌تر از Tm پرایمرها)
طویل‌سازی: ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ ثانیه (برای اهداف زیر ۱ کیلوباز؛ برای اهداف بلندتر بر مبنای ۱ دقیقه به ازای هر کیلوباز) ۳. طویل‌سازی نهایی: دمای ۷۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۵ دقیقه (۱ چرخه) پس از پایان برنامه ترموسایکلر، بدون نیاز به افزودن لودینگ دای، حجم مورد نظر از محصول واکنش (مثلاً ۱۰ میکرولیتر) را مستقیماً درون چاهک ژل آگارز لود نمایید.
کاربردها و زمینه‌های مصرف
این محصول انتخابی کاربردی برای واکنش‌های معمول و استاندارد PCR، غربالگری کلونی‌ها (Colony PCR)، ژنوتایپینگ، تأیید سازه‌های کلونینگ، بررسی قطعات حاصل از هضم آنزیمی، و کلیه آزمایش‌هایی است که نیازمند غلظت استاندارد ۱.۵ میلی‌مولار منیزیم و بارگذاری مستقیم، سریع و بدون واسطه بر روی ژل الکتروفورز هستند.
شرایط نگهداری و پایداری
محصول برای نگهداری بلندمدت باید در فریزر و در دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد حفظ شود و تا تاریخ انقضای مندرج روی برچسب دارای پایداری کامل است. همچنین پس از نخستین ذوب، می‌توان مستر میکس را تا ۶ ماه در دمای مثبت ۴ درجه سانتی‌گراد درون یخچال نگهداری کرد تا از افت کیفیت ناشی از فریز و دفریز مکرر جلوگیری شود.