تعیین توالی به روش سنگر

توالی یابی سنگر

توالی یابی سنگر چیست؟

توالی یابی سنگر، همچنین به عنوان توالی یابی خاتمه زنجیره ای یا توالی یابی دی اکسی شناخته می شود، از زمان اختراع آن در دهه 1970، مرکز قوه توالی یابی DNA بوده است. این فرآیند بر اساس تشخیص نوکلئوتیدهای پایان‌دهنده زنجیره برچسب‌گذاری شده است که توسط یک DNA پلیمراز در طول تکثیر یک الگو ترکیب می‌شوند.

این روش به طور گسترده برای پیشبرد زمینه ژنومیک عملکردی و مقایسه ای، ژنتیک تکاملی و تحقیقات بیماری های پیچیده مورد استفاده قرار گرفته است. شایان ذکر است، روش دی اکسی در تعیین توالی اولین ژنوم انسان در سال 2002 به کار گرفته شد. به دلیل مناسب بودن آن برای اعتبارسنجی معمول آزمایش های شبیه سازی و قطعات PCR، توالی یابی Sanger یک تکنیک محبوب در بسیاری از آزمایشگاه ها در سراسر جهان است.

شرکت زیست فناوری پیشگام با بیش از 10 سال تجربه ارائه دهنده خدمات تعیین توالی DNA به روش سنگر به مراکز تحقیقاتی و دانشگاهی و آزمایشگاهی سرار کشور است.

مزایای توالی یابی سنگر چیست؟

توالی یابی DNA Sanger به طور گسترده برای اهداف تحقیقاتی مانند:

• هدف قرار دادن مناطق ژنومی کوچکتر در تعداد بیشتری از نمونه ها
• توالی نواحی متغیر
• تایید نتایج حاصل از مطالعات توالی یابی نسل بعدی (NGS).
• بررسی توالی های پلاسمیدی، درج ها، جهش ها
• ژنوتیپ نشانگرهای ریزماهواره
• شناسایی انواع ژنتیکی منفرد عامل بیماری

روش‌ و فناوری‌های توالی‌یابی سنگر

توالی یابی دئودوکسی بر اساس سنتز رشته های DNA است که مکمل یک رشته DNA الگو هستند. واکنش توالی یابی از تری فسفات های دئوکسی نوکلئوزیدی معمولی (dNTPs) و تری فسفات های دی اکسین نوکلئوزیدی اصلاح شده (ddNTPs) برای ازدیاد طول رشته استفاده می کند. ddNTP ها از نظر شیمیایی با یک برچسب فلورسنت و با یک گروه شیمیایی که تشکیل پیوند فسفودی استر را مهار می کند، تغییر می یابد و باعث می شود DNA پلیمراز هر زمان که یک ddNTP ترکیب می شود، گسترش DNA را متوقف کند. قطعات DNA به دست آمده تحت الکتروفورز مویرگی قرار می گیرند، جایی که قطعات از طریق یک ماتریکس ژل مانند با سرعت های مختلف بر اساس اندازه خود جریان می یابند. هر یک از چهار ddNTP اصلاح شده دارای یک برچسب فلورسنت مجزا هستند. سیگنال فلورسانس ساطع شده از هر رنگ فلورسنت برانگیخته، هویت نوکلئوتید را در الگوی DNA اصلی تعیین می کند.